3475916239

W trakcie wykonywania rozmazu wszystkie czynności należy wykonywać w pobliżu palnika, pamiętając o opalaniu ezy i wylotów probówek w trakcie pobierania materiału.

Barwienie metodą Grama

Barwienie metodą Grama jest podstawowym barwieniem różnicującym stosowanym w mikrobiologii, dzielącym bakterie na dwie grupy: gramdodatnie i gramujemne.

W metodzie tej wykorzystuje się kolejno następujące odczynniki:

-    barwnik podstawowy - fenolowy roztwór fioletu krystalicznego (gencjana);

-    zaprawę w postaci roztworu jodu w jodku potasu (płyn Lugola);

-    odbarwiacz - alkohol etylowy;

-    barwnik kontrastowy - alkoholowo-wodny roztwór fuksyny zasadowej (fuksyna 1:10) lub safranina.

Wykonanie barwienia

-    Na utrwalony preparat należy nalać świeżo przesączony przez bibułę roztwór gencjany na 2 minuty;

-    preparat spłukać wodą;

-    nalać płyn Lugola na 1 minutę;

-    spłukać wodą;

-    odbarwiać alkoholem przez 15-20 sekund;

-    spłukać wodą;

-    dobarwić przez zalanie na 20 sekund roztworem fuksyny;

-    spłukać wodą;

-    osuszyć lekko odciskając w bibule.

Wynik barwienia:

Bakterie gramdodatnie - fioletowogranatowe, gramujemne - różowe.

O wyniku barwienia w metodzie Grama decyduje grubość warstwy peptydoglikanu ściany komórkowej. Warstwa peptydoglikanu bakterii gramdodatnich jest grubsza niż u bakterii gramujemnych. Fiolet krystaliczny przedostaje się do wnętrza komórki i łącząc się z jodem tworzy nierozpuszczalny w wodzie kompleks, który⁷ zabarwia ją na kolor fioletowy. Alkohol stosowany jako odbarwiacz, rozpuszcza błonę cytoplazmatyczną

13