5600235566

I Konferencja Naukowa Enzymos Enzymy w nauce i przemyśle Wystąpienia Gości Honorowych_

Mechanizm inhibicji syntazy tymidylanowej przez N⁴-hydroksy-dCMP w świetle badań krystalograficznych

Anna Dowierciał, Instytut Biologii Doświadczalnej im. M. Nenckiego PAN, Warszawa,

Piotr Wilk, Instytut Biologii Doświadczalnej im. M. Nenckiego PAN, Warszawa,

Adam Jarmuła, Instytut Biologii Doświadczalnej im. M. Nenckiego PAN, Warszawa,

Krzysztof Krawiec, Uniwersytet Warszawski, Instytut Fizyki Doświadczalnej, Warszawa,

Wojciech Rypniewski, Instytut Chemii Bioorganicznej PAN, Poznań, Poland

Borys Kierdaszuk, Uniwersytet Warszawski, Instytut Fizyki Doświadczalnej, Warszawa,

Wojciech Rode Instytut Biologii Doświadczalnej im. M. Nenckiego PAN, Warszawa

Syntaza tymidylanowa (TS; EC 2.1.1.45), cel molekularny w chemioterapii, katalizuje metylację dUMP do DTP, z równoległym przekształceniem N^5l()-metylenotetrahydrofolianu (meTHF) to dihydrofolianu (DHF). Analog substratu, N⁴-hydroksy-dCMP (N⁴-OH-dCMP), podobnie jak 5-fluoro-dUMP (FdUMP), jest inhibitorem TS, współzawodniczym w stosunku do dUMP oraz zależnym od czasu i meTHF. Jednak w odróżnieniu od [5-³H]dUMP, zastępując ten ostatni w mieszaninie reakcyjnej, analog nie uwalnia ³H z C(5) uracylu. Tylko anti-imino izomer wydaje się być aktywną formą inhibitora.

Rozwiązaliśmy struktury, oparte na kryształach utworzonych przez białko mysiej TS (mTS) w obecności meTHF i FdUMP (rozdzielczość 1.55A) lub N⁴-OH-dCMP (rozdzielczość 1.17A). O ile pierwsza struktura zgodnie z oczekiwaniami odpowiadała kowalencyjnie powiązanemu kompleksowi trój cząsteczkowemu TS-FdUMP-meTHF, druga struktura ujawniła kompleks trój cząsteczkowy enzymu z N⁴-OH-dCMP (izomer anti-imino) i niekowalencyjnie związanym DHF, zamiast oczekiwanego

19