2906542754

136 K. KALETHA [18]

gdzie V‘, V^p oraz K®,, K_m to odpowiednio szybkości maksymalne i stałe Michaelisa dla obu kierunków reakcji. Po scałkowaniu równanie to przyjmuje postać:

136 K. KALETHA [18]

gdzie [P]_eq to stężenie produktu w stanie równowagi termodynamicznej określonej stałą równowagi:

_K _ [P].q [A]o — [A]tq [P]cq _ _

^eQ [A]eq [A]_eq    [A]o — [P]eq V^P K‘

Równanie 11.19. przekształcić można w taki sposób, że daje się ono przedstawić jako szereg potęgowy postaci:

[P]/t = a{l + bt[l+ct(...)]}

lub

-(l/t)In(l -tP]/[P]_eq) = ot{1 + pt[l +_Yt(.-)]},

gdzie a, b, c względnie a, (), y, to współczynniki szeregu wyrażone parametrami kinetycznymi reakcji. Ekstrapolując zależność [Pj/t-^-t do czasu zerowego, dla określonego stężenia substratu wyznaczyć możemy szybkość początkową reakcji. Znając szybkości początkowe reakcji dla dwu przynajmniej stężeń substratu, wartości K_m i V wyznaczyć możemy graficznie, względnie też możemy je wyliczyć z odpowiedniego wzoru (24).

Inny sposób wykorzystania scałkowanego równania szybkości reakcji dla wyznaczenia parametrów kinetycznych odwracalnej, jedno i dwu-substratowej reakcji enzymatycznej przedstawił S c h w e r t (25). Opisana przez niego metoda, sprawdzona na przykładzie reakcji katalizowanej przez dehydrogenazę mleczanową (26) polega w ogólności na badaniu przebiegu reakcji dla dwu różnych wyjściowych stężeń substratu [A]₀. Szukane parametry kinetyczne (K_m, V) otrzymujemy rozwiązując układ dwu równań opisujących krzywe przebiegu reakcji.

W miarę postępu jaki dokonał się ostatnio w badaniach kinetycznych, możliwe stało się w wielu wypadkach wniknięcie w mechanizm badanej reakcji enzymatycznej. Opisano do tej pory wiele rodzajów mechanizmów wedle których mogą przebiegać reakcje enzymatyczne (27). Odpowiadające