Data wykonania: 14.11.2007

Wydział: Chemiczny

Kierunek: BIOTECHNOLOGIA

„Wyznaczanie optymalnego stężenia TTC podczas oznaczania aktywności dehydrogenaz za pomocą testu TTC”

Sławomir Szczotka

Damian Loska

I MATERIAŁY I ODCZYNNIKI

• 16 probówek o pojemności 10ml

• roztwór wodny Na₂SO₃ 0,2%

• roztwór TTC stęż. 2%

• alkohol metylowy

• woda destylowana

• osad czynny

II CEL ĆWICZENIA:

Wyznaczenie optymalnego stężenia TTC

III PRZEBIEG ĆWICZENIA
Do oznakowanych szesnastu próbówek wprowadziliśmy zgodnie z poniższą tabelką następujące objętości (w ml) reagentów

Reagent	Próbówki
	1 i 2	3 i 4	5 i 6	7 i 8	9 i 10	11 i 12	13 i 14	15 i 16
Na2SO3	1	1	1	1	1	1	1	1
Woda	0,9	0,8	0,7	0,6	0,5	0,3	0,2	0
Roztwór TTC	0,1	0,2	0,3	0,4	0,5	0,7	0,8	1
Osad czynny	8	8	8	8	8	8	8	8

Następnie probówki inkubowano w ciemności ok. 22 min. Po inkubacji probówki zwirowano, odrzucono supernatant, dodano do każdej po 8 ml metanolu, dzięki któremu przerwano reakcję enzymatyczną i zamieszano. Następnie ponownie odwirowano. Kolejno zmierzono ekstynkcję cieczy znad osadu. Wykorzystując wzór dla spekola B: y =21,057x - 0.1972 obliczono TF oraz wyliczono średnie stężenie TTC w próbówkach.

Lp.	Ekstynkcja	TF	Średnia wartość TF	Stężenie TTC
1.	0,757	15,743	15,45	0,0002
2.	0,729	15,153
3.	1,015	21,176			20,13	0,0004
4.	0,916	19,091
5.	1,090	22,755			22,54	0,0006
6.	1,070	22,334
9.	1,088	22,713			22,51	0,001
10.	1,069	22,313
11.	1,010	21,070			20,93	0,0014
12.	0,997	20,797
13.	0,969	20,207			20,33	0,0016
14.	0,981	20,460
15.	0,923	19,238			18,78	0,002
16.	0,879	18,312

Z powodu błędu w trakcie dodawania reagentów do próbówek musieliśmy odrzucić probówkę 7 i 8 gdyż zapomniano dodać do nich roztworu TTC i przez to nie można było odczytać ich ekstynkcji.

Dane z tabelki przedstawiono na wykresie:

IV WYNIKI:

Największe stężenie TF otrzymano w próbce nr 5. Wynika stąd, że w tej próbce znajduje się optymalne stężenie TTC. Wynosi ono 0,06%.

---