DSCF6750

108

kolumny przez około 15-20 minut. Kolumna jest gotowa do analizy jeżeli linia podstawowa jest w postaci odcinka prostoliniowego.

2. Przygotowanie roztworów

-    Roztwór wzorcowy 1.

1 ml benzenu przenieść do kolbki miarowej pojemności 10 ml, rozpuścić w chloroformie i uzupełnić chloroformem do kreski.

-    Roztwór wzorcowy 2.

1 ml nitrobenzenu przenieść do kolbki miarowej pojemności 10 ml, rozpuścić w chloroformie i uzupełnić chloroformem do kreski.

-    Roztwór wzorcowy 3.

1 ml ksylenu przenieść do kolbki miarowej pojemności 10 ml, rozpuścić w chloroformie i uzupełnić chloroformem do kreski.

-    Roztwór wzorcowy 4.

1 ml benzenu, nitrobenzenu i ksylenu przenieść do kolbki miarowej pojemności 10 ml, rozpuścić w chloroformie i uzupełnić chloroformem do kreski.

-    Roztwór wzorcowy 5.

1 ml benzenu i ksylenu przenieść do kolbki miarowej pojemności 10 ml, rozpuścić w chloroformie i uzupełnić chloroformem do kreski.

3. Sporządzanie chromatogramów.

Na kolumnę nanieść po 25 pl roztworów wzorcowych używając zaworu o stałej objętości dozowania. W tym celu nabrać około 2 ml roztworu do strzykawki (wypchnąć pęcherzyk powietrza) i igłę strzykawki umieścić we wlocie iniektora. Dalej postępować zgodnie z załączoną instrukcją. Po uzyskaniu piku, wprowadzić na kolumnę kolejną próbkę. Na podstawie uzyskanego chromatogramu wyliczyć czasy retencji (tr) i wspłóczynniki retencji pików. Założyć, że otrzymany pik jest trójkątem równoramiennym.

4. Opracowanie wyników.

-    Porównać czasy retencji pików otrzymanych w wyniku chro* matografowania analizowanych mieszanin z czasami retencji pików wzorców.

-    Obliczyć WRPT, współczynnik asymetrii oraz zdolność rozdzielczą (R,).

-    Zinterpretować otrzymane wyniki i chromatogramy.

-    Wyniki zapisać w zeszycie kontroli kolumny.

38. WYZNACZANIE GRANICY DETEKCJI KWASU RUBEANOWEGO W CHROMATOGRAFII CIENKOWARSTWOWEJ

ćwiczenie ma na celu wyznaczenie granicy detekcji kwasu „M^owego w chromatografii cienkowarstwowej (z ang. thin layer Munatography - TLC) wykorzystując różne sposoby wywoływania Mjinatogramów. Kwas rubeanowy ma następujący wzór strukturalny:

c NH₂

m

NHi

Plamki kwasu rubeanowego o odpowiednim stężeniu są pwne, więc nie trzeba używać innych substancji do wizualizacji płytek »tym poziomie stężenia. Wizualizację chromatogramów o niższych rżeniach przeprowadza się następującymi metodami:

-wywoływanie w komorze jodowej -oglądanie pod lampąUV

-zastosowanie różnych reakcji barwnych poprzez spryskiwanie lotnymi wywoływaczami np. roztworem manganianu (VII) potasu lub Wąsem siarkowym (VI)

-zastosowanie reakcji powodujących pojawienie się białych plam na barwnym tle np. reakcja jodo-azydkowa.

Odczynniki

Wodorotlenek sodu cz.d.a., roztwór o stężeniu c(NaOH) = 0.1 mol/l.

Roztwór do spryskiwania (2) zawierający azydek sodu w stężeniu 40 g/l i skrobię w stężeniu 5 g/l doprowadzony do pH 8.5 za pomocą kwasu solnego.

Manganian (VII) potasu cz.d.a., 0.1% roztwór wodny.

Roztwór do spryskiwania (1): 0.1% roztwór manganianu (VII) potasu rozcieńczyć 10-krotnie.

Metanol do HPLC.

Kwas rubeanowy cz.d .a.

5 szt.

Aparatura i sprzęt laboratoryjny Kolby miarowe pojemności 10 ml