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Transfert de caractćres de rćsistance au Verticilhum chez la pomme de terre 293

Des tests a partir des inoculations artificielles a 1’aide de spores de champignon ont ete effectues en serre contrólee sur les clones parentaux et hybrides. Les symptómes foliaires ont ete notifies selon des criteres morphologiques en utilisant deux indices (Beye et Lafay, 1985), « Indice d’etendue des symptómes foliaires ou IESF » et « Indice d’alteration foliaire ou 1AF » qui refletent respectivement la progression et la gravite de la maladie.

RESULTATS ET DISCUSSION Electrofusion et culture des protoplastes

Sous feffet du courant alternatif (230 V/cm ; 1 Mhz), les protoplastes migrent et s'alignent en chaines paralleles, etablissant ainsi le contact membranaire necessaire a la fusion cellulaire. La fusion des protoplastes alignes se produit des l’envoi des impulsions de courant continu. Le taux de fusion est estime a environ 40 % de Fensemble du melange de protoplastes apres Fapplication de 2 impulsions du courant continu (1200 V/cm pendant 40 |is chacune, Jadari et al. 1992).

II est interessant de noter que le comportement des protoplastes est peu affecte par les traitements electriques lors du processus d'electrofusion. Cultives dans le milieu VKM (Binding et al. 1978), plus de 90 % des protoplastes issus du traitement d'electrofusion synthetisent leur paroi cellulaire apres 48 h de culture, identifiables grace a la perte de la formę spherique des protoplastes. Les premieres divisions cellulaires n‘apparaissent qu'apres 4-5 jours de culture. Globalement pour fensemble des fusions realisees. environ 45 % des protoplastes traites ont survecu, et dont 20 %, soit 9,0 % des protoplastes initialement mis en culture, ont subi des divisions soutenues aboutissant a la formation de microcals visibles a l’oeil nu apres 2 semaines de culture. Apres 2 a

3    semaines de culture, afin d’eviter le brunissement des microcals, et de stimuler leur croissance, les cultures ont ete diluees 10 fois dans le milieu VKM dont les regulateurs de croissance ont ete remplaces par 0,2 mg/l de 2,4-D et 2 mg/l de BAP. Les microcolonies se developpent rapidement en cals. Cependant, un sejour trop prolonge. au-dela de 6-8 semaines, dans le milieu de dilution conduit a farret de croissance des cals dont certains brunissent et meurent quelques semaines plus tard. Le maintien d'une croissance rapide et soutenue de cals necessite leur transfert, a 1’aide d'une pipette de 5 ml, sur du milieu MS (Murashige et Skoog 1962) solide contenant des vitamines (Morel et Wetmore 1951), 20 g/1 de saccharose, 7 g/l d'agar et 0,5 mg/l zeatine et 0,5 mg/l de d’ANA. Sur le milieu de croissance, on peut observer plusieurs types de comportement de cals. Trois a 4 semaines plus tard, les cals les plus developpćs, et dont la taille atteint 3-4 mm, sont transferes sur le milieu de regeneration contenant notamment 2 mg/l de zeatine et 0,1 mg/l d‘AIA. Les premiers bourgeons regeneres, a raison d’l a 3 par cal regenerant, sont apparus apres

4    semaines sur le milieu de regeneration. Ceux ayant developpe 2 a 3 feuilles etalees sont preleves et multiplies dans du milieu MS pour des analyses ulterieures.

Identification des hybrides somatiques

La selection precoce des hybrides somatiques putatifs est basee sur la vigueur des plantes regenerees qui s’expriment notamment a travers une regeneration precoce (Sihachakr et al. 1994). Elle est egalement basee sur les caracteres morphologiques intermediaires des hybrides. La selection precoce des hybrides somatiques, utilisant la vigueur des plantes comme criteres de selection, a ete appliquee avec succes pour isoler notamment des hybrides somatiques de pomme de terre et d'aubergine (Chaput et al. 1990, Jadari et al. 1992 ; Serraf et al. 1991, 1994 ; Daunay et al. 1993 ; Sihachakr