Laboratorium

Analizy Instrumentalnej

2. Luminescencja

Pracownia Analizy Instrumentalnej

2 . L U M I N E S CE N C J A

REWERS

1. Kolbki poj. 10 ml (w statywie) 6 szt
2. Kuweta 1 cm + wzorzec fluorescencji (w pojemniku)

3. Pipeta aut. nastawialna poj. 0.2 do 1 ml

1 szt

4. Pipety miarowe: poj. 2 ml

1 szt

poj. 10 ml

1 szt

5. Cylinder miarowy poj. 50 ml

1 szt

6. Erlenmajerka poj. 100 ml

1 szt

7. Nasadka na pipety

1 szt

8. Zlewki: 150 ml

1 szt

400 (lub 600) ml

1 szt

9. Pipeta plastikowa

1 szt

10. Tryskawka

1 szt

Odczynniki:

Bufor uniwersalny cz. A
Bufor uniwersalny cz. B
10

-4

M fluoresceina

Wykonanie ćwiczenia

Zadanie: Oznaczanie substancji fluoryzującej - tryptoflawiny

Aparatura: Spektrofotometr SPECOL z przystawką do pomiaru fluorescencji

Oznaczenia klawiszy:
T

- pomiar transmitancji

E

- pomiar ekstynkcji

C

- pomiar stężenia na podstawie ekstynkcji

CAL - kalibrowanie: urządzenie sprowadza się do stanu pomiarowego, w którym po

wprowadzeniu koncentracji zadanej próbki standardowej urządzeniu ustala
współczynnik przeliczeniowy do wyznaczania stężenia i przenosi go do pamięci
współczynników

FL - pomiar fluorescencji, zmętnienia, reemisji

KIN - określanie aktywności przy pomiarach kinetyki reakcji. Klawisz służy do wyboru

START

rodzaju pomiaru „KINETYKA” i rozpoczynania pomiaru przy mierzeniu kinetyki

R

- referencja: przy pomiarze fluorescencji lub zmętnienia naciśnięcie klawisza R
wywołuje wskazanie 1.000 lub F

Wykonanie zadanie:

1. Sporządzić 80 ml buforu o pH = 2 przez zmieszanie 78 ml buforu uniwersalnego A z 2 ml

buforu uniwersalnego B.

2. Do sześciu kolbek o pojemności 10 ml odmierzyć roztwór wzorcowy 5x10

–4

M

tryptoflawiny w ilościach od 0,2 do 1 ml – w każdej z kolbek inną objętość, dowolnie
ustaloną, z zakresu 0,2 do 1 ml. Każdą z kolbek oraz kolbkę z analizowanym roztworem
uzupełnić do kreski buforem o pH=2 i starannie wymieszać ich zawartość.

3. Zmierzyć natężenie fluorescencji roztworów wzorcowych i analizowanego.
W celu wykonania pomiaru, należy w jednym uchwycie umieścić wzorzec fluorescencji, a w
drugim kuwetę z przygotowanym roztworem. Następnie włożyć uchwyt z wzorcem do
komory pomiarowej i wcisnąć T, a następnie R. Przesunąć uchwyt tak, by w komorze
pomiarowej znalazła się kuweta z badanym roztworem. Odczytać wynik i wpisać do arkusza
sprawozdania.

Opracowanie wyników:

Sporządzić wykres zależności natężenia fluorescencji od stężenia substancji badanej (krzywa
kalibracji). Z tego wykresu odczytać stężenie roztworu analizowanego. Wynik podać jako
liczbę moli oznaczanej substancji.