Ćw. 7 Test zahamowania migracji makrofagów.

•

Cel:

wykrycie jednej z cytokin, zwanej czynnikiem hamującym migrację (MIF – Migration

Inhibitory Factor)

• Pobudzone antygenem (np. endotoksyną – LPS) monocyty i makrofagi wytwarzają cytokinę

MIF zatrzymującą te komórki w miejscu infekcji. Cytokina ta jest miernikiem odpowiedzi
komórkowej na dany antygen.

• Badanie wykonuje się w rurkach kapilarnych, w których obecne są leukocyty izolowane z krwi

lub wysięku otrzewnowego.

•

Jeśli brak jest antygenu

, to komórki ruchliwe (makrofagi i monocyty) wędrują z kapilary do

otaczającego środowiska.

•

Dodanie do płynu hodowlanego swoistego antygenu

skutkuje wydzielaniem przez uczulone

limfocyty T cytokiny MIF, a co za tym idzie zahamowanie migracji makrofagów.

Mierząc strefy zajęte przez wędrujące komórki w próbie badanej i kontrolnej, można określid stopieo
zahamowania ich migracji (MII – Migration Inhibitory Index) korzystając ze wzoru:

% zahamowania migracji makrofagów:

średni obszar migracji w obecności antygenu

średni obszar migracji bez antygenu

Wykonanie:

1. Komory do testu przemyd alkoholem i wytrzed jałową gazą.

2. Z jednej strony nakleid (smar silikonowy) szkiełko nakrywkowe.

3. Nakłud palec jałową igłą.

4. Wprowadzid krew do dwóch kapilar na wysokośd około 1cm.

5. Pusty koniec kapilary zatopid w płomieniu palnika i odwirowad przez 7 min przy 500xg w

wirówce hematokrytowej.

6. Po odwirowaniu uciąd kapilarę na granicy płynu i osadu komórek.

7. Odcięte kapilary przykleid częścią zatopioną do dna komory smarem silikonowym.

8. Jedno oczko komory wypełnid płynem Eagle‘a bez antygenu (

kontrola

), drugie - płynem

Eagle‘a z dodatkiem antygenu (

próba badana

).

9. Oczka komory zakleid szkiełkami nakrywkowymi, a otwory boczne zakleid parafiną.

10. Płytki umieścid w wilgotnej komorze i inkubowad przez 24h w 37

o

C.