Poł czenie techniki LC ze spektrometri mas

dr in . Andrzej Wasik

dr in . Agata Kot-Wasik

Katedra Chemii Analitycznej

Wydział Chemiczny Politechniki Gda

ń

skiej

Analiza dwuwymiarowa

W typowym przypadku analiza chromatograficzna
dostarcza nam informacji dwuwymiarowej.

Najcz

ę

ś

ciej jest to zale

ż

no

ś

ć

mi

ę

dzy wielko

ś

ci

ą

sygnału

z detektora (1 wymiar) od czasu retencji (2 wymiar)

Czas

In

te

n

s

y

w

n

o

ś

ć

s

y

g

n

a

łu

t

r

i+1

t

r

i

t

r

i+2

Analiza dwuwymiarowa

Identyfikacja odbywa si

ę

na podstawie czasu retencji.

Porównujemy czas retencji analitu z czasem retencji wzorca.

Problem 1

W przypadku analizy skomplikowanych mieszanin nie mamy
pewno

ś

ci,

ż

e dany pik odpowiada pojedynczej substancji.

Problem 2

Niemo

ż

liwa jest identyfikacja nieznanych substancji.

Analiza dwuwymiarowa

Analiza HPLC-UV ekstraktu z Leuzea carthamoides

2.5

5

7.5

10

0

50000

100000

150000

200000

250000

300000

350000

400000

450000

?

?

?

?

?

?

?

?

?

?

Analiza dwuwymiarowa

Problem 1 - nakładanie si pików

Rozwi zanie

Powtórzy

ć

analiz

ę

przy u

ż

yciu kolumny z innym typem wypełnienia.

Rodzaj oddziaływa

ń

pomi

ę

dzy analitem a faz

ą

stacjonarn

ą

musi

by

ć

inny ni

ż

za pierwszym razem.

Zalety:

Wady:

- łatwo

ś

ć

wykonania

- niski koszt

- wysoka czasochłonno

ś

ć

Analiza dwuwymiarowa

Problem 2 - identyfikacja nieznanych substancji

Rozwi zanie

Zastosowa

ć

detektor dostarczaj

ą

cy informacji o strukturze analitu.

Innymi słowy zastosowa

ć

techniki ł

ą

czone

.

Zalety:

Wady:

- mo

ż

liwo

ś

ć

identyfikacji nieznanych

zwi

ą

zków

- informacja o ich masie cz

ą

steczkowej

i/lub strukturze

- łatwe wykrywanie faktu
nakładania si

ę

pików

- szybsze uzyskanie wyniku ko

ń

cowego

- wysokie koszty inwestycyjne

- wysokie wymagania
co do kwalifikacji personelu

Techniki ł czone

Dzi ki wykorzystaniu technik ł czonych informacja
analityczna zyskuje dodatkowy wymiar (struktura).

11

11.5

12

12.5

13

13.5

14

14.5

15

15.5

16

100

200

300

400

500

600

700

800

0

2000

4000

6000

8000

cz

as

m/z

in

te

n

s

yw

n

o

ś

ć

s

yg

n

a

łu

Przegl d technik ł czonych

GC-MS

SFC-MS

LC-GC-MS

LC-DAD

CE-DAD

GC-IR

SFC-IR

LC-GC-IR

LC-MS

CE-MS

GC-IR-MS

SFC-GC-MS

LC-ICP-MS

GC-AES

SFC-GC-IR

LC-IR

GC-ICP-MS

LC-NMR

GC-GC-MS

LC-MS-MS

LC-LC-MS

Tabela 1 Najpopularniejsze techniki ł

ą

czone

Techniki oparte o wykorzystanie spektrometrii mas (X-MS)

Podstawy spektrometrii mas

Spektrometria mas

- metoda okre

ś

lania masy (a

ś

ci

ś

lej

stosunku masy do ładunku m/z) cz

ą

stek naładowanych

elektrycznie (jonów).

Na poruszaj

ą

cy si

ę

ładunek elektryczny (jon) oddziałuje

zarówno pole elektryczne jak i magnetyczne.

W spektrometrach mas wykorzystujemy ten fakt aby z
mieszaniny jonów wybra

ć

te o konkretnym stosunku m/z

i skierowa

ć

je do detektora, dzi

ę

ki czemu mo

ż

na okre

ś

li

ć

ich ilo

ś

ć

w mieszaninie.

Techniki oparte o wykorzystanie spektrometrii mas (X-MS)

Podstawy spektrometrii mas

Wysokorozdzielczy analizator mas z podwójnym ogniskowaniem

Techniki oparte o wykorzystanie spektrometrii mas (X-MS)

Podstawy spektrometrii mas

Dwa najwa

ż

niejsze elementy spektrometru mas to:

• komora jonizacyjna

, czyli miejsce w którym powstaj

ą

jony, oraz

• analizator mas

Komora

jonizacyjna

Analizator mas

jony

wlot

próbki

HPLC-MS

TAK, ALE ... problem poł

ą

czenia LC i MS !

Przepływ fazy ruchomej w LC wymusza problemy zwi

ą

zane z

uzyskaniem wysokiej pró

ż

ni. Podczas analizy GC (faza ruchoma:

gaz) przepływ gazu u wlotu do MS wynosi około 0.5-2ml/min.

Podczas kiedy w HPLC faza ruchoma w postaci ciekłej daje

przepływ gazu u wlotu MS rz

ę

du 350ml/min w przypadku metanolu

i a

ż

1000 ml/min w przypadku wody!

( J.Abian "The coupling of Gas and Liquid Chromatography with Mass Spectrometry ")

HPLC, 1 ml/min, 100-250 bar

MS, pró

ż

nia

Techniki oparte o wykorzystanie spektrometrii mas (X-MS)

Podstawy spektrometrii mas

Techniki oparte o wykorzystanie spektrometrii mas (X-MS)

Podstawy spektrometrii mas - metody jonizacji analitów

Wyró

ż

ni

ć

mo

ż

na dwa rodzaje jonizacji:

• „mi

ę

kka”

jonizacja, podczas której tworzy si

ę

jedynie jon

molekularny (cz

ą

steczkowy) bez fragmentacji cz

ą

steczki,

• „twarda”

jonizacja, podczas której cz

ą

steczka rozpada si

ę

na

fragmenty

Istniej

ą

takie konstrukcje komór jonizacyjnych, które powoduj

ą

jedynie „mi

ę

kk

ą

” jonizacj

ę

analitów.

Natomiast podczas jonizacji „twardej” powstaje zawsze
mieszanina jonów cz

ą

steczkowych i fragmentów cz

ą

steczek

analitu.

Techniki oparte o wykorzystanie spektrometrii mas (X-MS)

Podstawy spektrometrii mas - metody jonizacji analitów

„Mi

ę

kka” i „twarda” jonizacja cz

ą

steczki analitu

M

M

stabilny
kationorodnik

M

M

niestabilny
kationorodnik

m

m

i

j

fragmenty

Techniki oparte o wykorzystanie spektrometrii mas (X-MS)

Podstawy spektrometrii mas - metody jonizacji analitów

Od sposobu jonizacji zale

ż

y ile informacji o strukturze zwi

ą

zku

mo

ż

na uzyska

ć

.

„Mi

ę

kka”

jonizacja pozwala jedynie okre

ś

li

ć

mas

ę

cz

ą

steczkow

ą

analitu.

Jonizacja

„twarda”

dostarcza informacji o masie

cz

ą

steczkowej i strukturze zwi

ą

zku.

Techniki oparte o wykorzystanie spektrometrii mas (X-MS)

Podstawy spektrometrii mas - metody jonizacji analitów

Metody jonizacji

Pole elektryczne

o wysokim nat

ę

ż

eniu

Bombardowanie

strumieniem cz

ą

stek

EI

FAB

ES/IS

FI

FD

Reakcje

chemiczne

CI

PB

MALDI

APCI/PIS

brak fragmentacji cz

ą

steczek

fragmentacja cz

ą

steczek, mo

ż

liwo

ś

ć

okre

ś

lenia struktury

Wysoka

temperatura

TS

ICP

Techniki oparte o wykorzystanie spektrometrii mas (X-MS)

Podstawy spektrometrii mas

Wybrane metody jonizacji próbek ciekłych

Techniki oparte o wykorzystanie spektrometrii mas (X-MS)

Jonizacja metod

ą

elektrorozpylania - Electro Spray Ionization (ESI)

wysokie napi

ę

cie

metalowa
kapilara

aerozol

N (~80°C)

2

do pompy

pró

ż

niowej

analizator

mas

dysza

separator

sto

ż

kowy

N (~80°C)

2

Ci

ś

nienie atmosferyczne

Pró

ż

nia

wysokie napi

ę

cie

metalowa
kapilara

aerozol

N (~80°C)

2

do pompy

pró

ż

niowej

analizator

mas

dysza

separator

sto

ż

kowy

N (~80°C)

2

Ci

ś

nienie atmosferyczne

Pró

ż

nia

Techniki oparte o wykorzystanie spektrometrii mas (X-MS)

Jonizacja metod

ą

elektrorozpylania - Electro Spray Ionization (ESI)

COULOMBOWSKA

EKSPLOZJA KROPLI

AEROLOZU

POWSTANIE JONÓW

[M+

[M+

nH

nH

]

]

n+

n+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+ +

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+ +

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+ +

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

ODPAROWANIE

ROZPUSZCZALNIKA

+

+

+

+

+

+

+

+ +

+

+

+

+

+

WYLOT

KAPILARY

2.5

5

7.5

10

0

50000

100000

150000

200000

250000

300000

350000

400000

450000

Techniki oparte o wykorzystanie spektrometrii mas (X-MS)

Jonizacja metod

ą

elektrorozpylania - Electro Spray Ionization (ESI)

Widma masowe pocz

ą

tku i

ko

ń

ca piku s

ą

ró

ż

ne

.

Oznacza to,

ż

e ten pozornie

pojedynczy pik powstał z
nało

ż

enia dwóch innych.

m/z

200

225

250

275

300

325

350

375

400

0

20

40

60

80

100

3

0

2

.7

3

1

6

.8

3

0

3

.8

2

8

6

.7

3

9

9

.7

m/z

200

225

250

275

300

325

350

375

400

0

20

40

60

80

100

2

8

6

.8

2

8

7

.8

HPLC–MS

analiza ekstraktu Nodularii

HPLC-MS

SCAN

SIM

Analiza widma MS

NH

H

H

H

H

H

OMe

H

N

H

O

H

N

H

COOH

O

CH

3

H

NH

O

O

N

H

NH

NH

2

N

H

O

CH

3

H

H

COOH

H

CH

3

[M+H]

+

= 825.4

M=824.4

Techniki oparte o wykorzystanie spektrometrii mas (X-MS)

Jonizacja metod

ą

elektrorozpylania - Electro Spray Ionization (ESI)

• Mo

ż

liwo

ś

ć

pracy w układzie faz odwróconych (faza ruchoma

mo

ż

e zawiera

ć

wod

ę

).

• Przepływ fazy ruchomej rz

ę

du 1 ml/min.

• Nadaje si

ę

do analizy zwi

ą

zków wysokocz

ą

steczkowych

(peptydy, białka), metaloorganicznych i nieorganicznych.

• „Mi

ę

kka” metoda jonizacji, niewielka fragmentacja jonów a co za

tym idzie trudno

ś

ci w okre

ś

leniu struktury analitu.

• Wysoka czuło

ś

ć

.

• Metoda przydatna do ł

ą

czenia z kapilarn

ą

elektroforez

ą

Techniki oparte o wykorzystanie spektrometrii mas (X-MS)

Jonizacja chemiczna pod ci

ś

nieniem atmosferycznym -

Atmospheric Pressure Chemical Ionization (APCI)

+

+

+

+

+

Gaz rozpylaj

ą

cy

Grzałka

Próbka ciekła

Igła wyładowcza

Wyładowanie
koronowe

1. Jonizacja cz

ą

stek

rozpuszczalnika

2. Reakcje powstałych
jonów z cz

ą

steczkami

analitu, tworzenie si

ę

klastrów. Przeniesienie
ładunku.

3. Rozpad klastrów

Pró

ż

nia

Ci

ś

nienie atmosferyczne

Gaz osłonowy

Analizator mas

Techniki oparte o wykorzystanie spektrometrii mas (X-MS)

Fotojonizacja chemiczna - Photo Ion Spray (PIS)

+

+

+

+

+

Gaz rozpylaj

ą

cy

Grzałka

Próbka ciekła

1. Jonizacja cz

ą

stek

fotoinicjatora

2. Reakcje powstałych
jonów z cz

ą

steczkami

analitu, tworzenie si

ę

klastrów. Przeniesienie
ładunku.

3. Rozpad klastrów

Pró

ż

nia

Ci

ś

nienie atmosferyczne

Gaz osłonowy

Analizator mas

Lampa UV

Techniki oparte o wykorzystanie spektrometrii mas (X-MS)

Jonizacja chemiczna pod ci

ś

nieniem atmosferycznym - (APCI)

Wygl

ą

d widma

masowego zale

ż

y nie

tylko od rodzaju
zwi

ą

zku ale tak

ż

e od

trybu i parametrów
jonizacji, oraz składu
fazy ruchomej.

N

N

N

O

SCH

3

NH

2

3

(H C)

3

C

Metribuzin

C H

N

8 14 4

O S

M. cz. : 214. 09

50

100

150

200

250

300

350

400

450

m/z

0.0e6

2.5e6

5.0e6

7.5e6

10.0e6

12.5e6

Int.

215

218

237

187

172

395

131

469

288

94

422

107

485

451

360

58

79

322

305

340

146

APCI-tryb dodatni

50

100

150

200

250

300

350

400

450

m/z

0

5000

10000

15000

20000

25000

Int.

198

183

168

152

407

280

228

55

141

243

122

92

213

430

258

445

314

294

339

496

69

368

464

352

396

478

APCI-tryb ujemny

N

N

N

O

SCH

3

NH

2

3

(H C)

3

C

Metribuzin

C H

N

8 14 4

O S

M. cz. : 214. 09

Techniki oparte o wykorzystanie spektrometrii mas (X-MS)

Jonizacja chemiczna pod ci

ś

nieniem atmosferycznym - (APCI)

• Mo

ż

liwo

ś

ć

pracy w układzie faz odwróconych (faza ruchoma

mo

ż

e zawiera

ć

wod

ę

).

• Przepływ fazy ruchomej rz

ę

du 2 ml/min.

• Przydatna do analizy zwi

ą

zków nielotnych, nietrwałych

termicznie, o małych i

ś

rednich masach cz

ą

steczkowych, mało i

ś

rednio polarnych.

• Stosunkowo „twarda” metoda jonizacji, odpowiedni dobór

parametrów jonizacji pozwala na fragmentacj

ę

cz

ą

steczek i

okre

ś

lenie struktury analitu.

• Wysoka czuło

ś

ć

i liniowo

ś

ć

odpowiedzi.

Techniki oparte o wykorzystanie spektrometrii mas (X-MS)

• Zakres przepływów tolerowanych w tej metodzie jest rz

ę

du ułamków mililitra na

minut

ę

. Współpraca LC z FAB mo

ż

liwa jest dzi

ę

ki zastosowaniu dzielników

strumienia eluenta. W przypadku CE dzielniki nie s

ą

potrzebne.

• Próbka musi by

ć

wymieszana/rozpuszczona w tzw. matrycy np. glicerolu,

tioglicerolu b

ą

d

ź

alkoholu nitrobenzylowym. Mo

ż

na to zrobi

ć

przed kolumn

ą

rozdzielcz

ą

(mo

ż

liwe problemy z rozdzieleniem) b

ą

d

ź

na jej wylocie (trudno

ś

ci

wykonawcze).

• Przydatna do analizy zwi

ą

zków nielotnych, nietrwałych termicznie, o du

ż

ych

masach cz

ą

steczkowych i wysokiej polarno

ś

ci (kwasy nukleinowe, leki, zwi

ą

zki

powierzchniowo czynne).

• „Mi

ę

kka” metoda jonizacji.

• Stosunkowo wysoka czuło

ś

ć

.

Jonizacja strumieniem szybkich atomów - (FAB)

Techniki oparte o wykorzystanie spektrometrii mas (X-MS)

Metody jonizacji próbek ciekłych (HPLC, CE)

Jonizacja metod

ą

elektrorozpylania - Electro Spray Ionization (ESI)

oraz

Jonizacja chemiczna pod ci

ś

nieniem atmosferycznym - Atmospheric

Pressure Chemical Ionization (APCI)

to w chwili obecnej dwie najcz

ę

ś

ciej stosowane metody jonizacji w

chromatografii cieczowej.

Wynika to z ich szerokiego spektrum zastosowa

ń

, łatwo

ś

ci u

ż

ycia, wysokiej czuło

ś

ci

oraz mo

ż

liwo

ś

ci pracy z przepływami fazy ruchomej rutynowo stosowanymi w HPLC.

ESI i APCI to komplementarne metody jonizacji.

Techniki oparte o wykorzystanie spektrometrii mas (X-MS)

Podstawy spektrometrii mas

Techniki oparte o wykorzystanie spektrometrii mas (X-MS)

Podstawy spektrometrii mas - rodzaje analizatorów mas

• Kwadrupolowe (pojedyncze i wielokrotne) (Quadrupole)

• Pułapki jonowe (Ion Trap)

• Analizatory czasu przelotu (Time-Of-Flight TOF)

• Sektory magnetyczne (Magnetic Sector)

• Sektory magnetyczne z podwójnym ogniskowaniem (Double Focusing

Magnetic Sector)

• Mieszane np. sektor magnetyczny/pułapka jonowa, kwadrupol/analizator

czasu przelotu (Hybrid)

Techniki oparte o wykorzystanie spektrometrii mas (X-MS)

Wpływ rozdzielczo

ś

ci na kształt pików

1.0 FWHM

0.7 FWHM

0.5 FWHM

0.3 FWHM

0.2 FWHM

0.1 FWHM

Techniki oparte o wykorzystanie spektrometrii mas (X-MS)

Analizator kwadrupolowy - Quadrupole

Ź

ródło jonów

Detektor

Pr

ę

ty kwadrupola

Ź

ródło zasilaj

ą

ce pr

ę

ty

kombinacj

ą

napi

ę

ć

, stałego

i o cz

ę

stotliow

ś

ci radiowej

Techniki oparte o wykorzystanie spektrometrii mas (X-MS)

Analizator kwadrupolowy - Quadrupole

Wygl

ą

d analizatora

kwadrupolowego z pr

ę

tami o

przekroju hiperbolicznym,
firmy

Thermo

Finnigan

Techniki oparte o wykorzystanie spektrometrii mas (X-MS)

Analizator kwadrupolowy - cechy

• Najpowszechniej spotykany typ analizatora

• Typowy zakres m/z: 50 - 2000

• Stosunkowo mała pr

ę

dko

ś

ć

zbierania pełnych widm (niska czuło

ś

ć

w

trybie Full Scan)

• Wysoka czuło

ś

ć

w trybie SIM

• Relatywnie niska rozdzielczo

ś

ć

(siła rozdzielcza)

• Wysoka odtwarzalno

ś

ć

(dobrze nadaje si

ę

do pomiarów ilo

ś

ciowych)

• Du

ż

y zakres dynamiczny (zdolno

ś

ć

do pomiaru zarówno du

ż

ych jak i

małych sygnałów)

Techniki oparte o wykorzystanie spektrometrii mas (X-MS)

Pułapka jonowa - Ion Trap

Techniki oparte o wykorzystanie spektrometrii mas (X-MS)

Pułapka jonowa - cechy

• Małe rozmiary, łatwo

ś

ć

konserwacji

• Wysoka pr

ę

dko

ś

ć

zbierania pełnych widm (du

ż

a czuło

ś

ć

w trybie Full Scan)

• Stosunkowo niska czuło

ś

ć

w trybie SIM

• Wysoka rozdzielczo

ś

ć

, doskonała do pomiarów jako

ś

ciowych (identyfikacja)

• Mo

ż

liwo

ś

ć

przeprowadzania wielokrotnych eksperymentów MS-MS

• Mały zakres dynamiczny

• Stosunkowo słaba odtwarzalno

ś

ć

• Jako

ś

ć

widm zale

ż

y od wielu parametrów

Techniki oparte o wykorzystanie spektrometrii mas (X-MS)

Analizator czasu przelotu - Time Of Flight (TOF)

Płytki ogniskuj

ą

ce

Obszar

przelotu jonów

Repeler

Detektor

Laser

Próbka

Schemat analizatora czasu przelotu ze

ź

ródłem jonów typu MALDI

Techniki oparte o wykorzystanie spektrometrii mas (X-MS)

Analizator czasu przelotu - cechy

• Najszybszy ze znanych analizatorów mas

• Najszerszy praktyczny zakres m/z

• Wysoka czuło

ś

ć

• Wysoka rozdzielczo

ś

ć

(siła rozdzielcza)

• Z natury przystosowany do pracy z impulsowymi

ź

ródłami jonów jak np.

MALDI, cho

ć

istniej

ą

konstrukcje przystosowane do pracy z np. EI

• Wysokie wymagania co do pr

ę

dko

ś

ci detektora

Techniki oparte o wykorzystanie spektrometrii mas (X-MS)

Technika MS

n

Gaz reakcyjny np. argon

Monitorowanie jonów fragmentacyjnych pochodz

ą

cych od wybranego prekursora

(Product (Fragment) Ion Scan)

CID

Techniki oparte o wykorzystanie spektrometrii mas (X-MS)

Technika MS

n

Technika monitorowania jonów fragmentacyjnych pochodz

ą

cych od

wybranego prekursora (Product Ion Monitoring) pozwala na wygodne
okre

ś

lenie struktury wybranego analitu (parent ion).

Niektóre opublikowane zastosowania to:

• wczesna diagnoza niektórych chorób genetycznych np. choroby

Fabry’ego

• wykrywanie oraz identyfikacja narkotyków i

ś

rodków farmakologicznych

w płynach ustrojowych (bardzo skomplikowana matryca)

• wykrywanie oraz identyfikacja bojowych

ś

rodków truj

ą

cych (BST) i

potencjalnych BST w warunkach polowych

Techniki oparte o wykorzystanie spektrometrii mas (X-MS)

Technika MS

n

Gaz reakcyjny np. argon

Monitorowanie wybranego jonu fragmentacyjnego pochodz

ą

cego od wybranego prekursora

(Selected Reaction Monitoring - SRM)

ZASTOSOWANIE TECHNIKI HPLC-MS

■

Oznaczanie

ś

rodków dopinguj

ą

cych

(zwłaszcza podczas wszelkich zawodów sportowych !)

■

Ustalanie sekwencji aminokwasów

(pomy

ś

l o wszelkich chorobach genetycznych)

■

Oznaczanie pozostało

ś

ci antybiotyków, zawarto

ś

ci witamin,

obecno

ś

ci hormonów w paszach zwierz

ę

cych, ich mi

ę

sie

oraz produktach z nich otrzymywanych

(przecie

ż

na fermach stosuje si

ę

ogromne ilo

ś

ci zwi

ą

zków

zabezpieczaj

ą

cych tysi

ą

ce zwierz

ą

t przed chorobami i zmuszaj

ą

ce

je do szybkiego wzrostu)

■

Identyfikacja narkotyków

(policja, medycyna s

ą

dowa)

ZASTOSOWANIE TECHNIKI HPLC-MS

■

Oznaczanie flawonoidów

(tutaj przykład identyfikacji flawonoidów obecnych w sokach owocowych)

min

4

6

8

10

12

14

16

50000

100000

150000

200000

250000

Mm/z

100

200

300

400

0

20

40

60

80

100

1

1

2

.9

3

2

5.

0

2

1

8.

8

3

9

0.

9

2

2

0.

8

3

6

6.

9

4

4

0.

8

1

6

9.

0

3

8

9.

1

500

[M-H]-

2

8

9.

0

3

2

6.

0

[M-H]-

?

Cl

Cl

O

CH

2

COOH

1

6

0.

8

161

2,4 - D

Pseudomolecular ion

of contaminant

coeluted with 2,4-D

(-)Epicatechin-3- -gallate (ECG)

O

600

O

O

H

OH

O

O

OH

OH

OH

OH

OH

169

289

HPLC-ESI-MS

ZASTOSOWANIE TECHNIKI HPLC-MS

■

Identyfikacja cjanotoksyn obecnych w wodzie morskiej

pojawiaj

ą

cych si

ę

w czasie zakwitów alg

(zwykle w sierpniu w okolicach pla

ż

trójmiejskich jest ich

pełno, a pla

ż

e s

ą

zamkni

ę

te dla k

ą

pi

ą

cych si

ę

na kilka dni)

MS-SCAN analiza ekstraktu: jezioro Karczemne

[M+H]

[M+H]

+

+

NH

2

+

O

Anatoksyna A

NH

CH

3

H

H

C

H

3

H

CH

3

H

H

H

O

N

H

O

C

H

3

H

N

O

OH

H

NH

CH

2

O

CH

3

A

H

C

H

3

O

N

H

H

NH

O

N

H

OH

R1

H

H

NH

2

N

H

MC RR

[M+2H]

[M+2H]

2+

2+

NH

2

+

O

Anatoksyna A

NH

CH

3

H

H

C

H

3

H

CH

3

H

H

H

O

N

H

O

C

H

3

H

N

O

OH

H

NH

CH

2

O

CH

3

A

H

C

H

3

O

N

H

H

NH

O

N

H

OH

R1

H

H

NH

2

N

H

MC RR

MS-SIM analiza ekstraktu: jezioro Karczemne

Jon monitorowany:

166 (Anatoksyna-a)

Jon monitorowany:

995 (MC-LR)

Jon monitorowany:

520 (MC-RR)

Jon monitorowany:

825 (Nod)

1046 (MC-YR)

ZASTOSOWANIE TECHNIKI HPLC-MS

■

Identyfikacja produktów degradacji wielu trwałych organicznych

zanieczyszcze

ń

ś

rodowiska

(POP’s, wprowadzone do

ś

rodowiska pozostaj

ą

w nim na długo, po czym

w warunkach naturalnych podlegaj

ą

fotodegradacji, termicznej i

mikrobiologicznej degradacji z utworzeniem cz

ę

stokro

ć

wielokrotnie

bardziej szkodliwych produktów)

m/z

220

240

260

280

0

20

40

60

80

100

2

4

1

.0

2

3

9

.0

2

5

5

.1

2

8

3

.0

2

6

7

.0

2

4

0

.0

OH

OH

H

H

O

O

O

O

- CO

- CO

-1/2 O2

-2H2

m/z 286

m/z 283

m/z 255

m/z 239

m/z 267

+

H

+

H

+

H

+

H

A

rb

itr

a

ry

In

te

n

si

ty

[

%

]

ZASTOSOWANIE TECHNIKI HPLC-MS

■

Analiza zawarto

ś

ci kumaryny w nalewach na traw

ę

ż

ubrow

ą

i w

ż

ubrówce

(Kumaryna - benzopiron, substancja organiczna (lakton kwasu

o-hydroksycynamonowego) o przyjemnym zapachu

ś

wie

ż

ego

siana. Jest stosowana w przemysłach: perfumeryjnym,

mydlarskim, tytoniowym. Poniewa

ż

stwierdzono,

ż

e kumaryna

powoduje marsko

ś

ć

w

ą

troby u zwierz

ą

t laboratotyjnych została

ona niemal całkowicie wycofana z produktów spo

ż

ywczych w

Europie i USA).

■

Analiza pozostało

ś

ci niesteroidowych

ś

rodków

przeciwzapalnych i przeciwbólowych (NSAID) w wodach

(NSAID s

ą

ju

ż

w niektórych krajach obecne w wodzie pitnej na

poziomie ppt, powoduj

ą

c efekt lekoodporno

ś

ci).

tolmetin

naproxen

fenoprofen

diflunisal

ibuprofen

diclofenac

Techniki ł czone

●

Konieczno

ś

ć

analizy próbek o skomplikowanym składzie wmusza

zastosowanie technik ł

ą

czonych.

●

Wymagania co do wiarygodno

ś

ci wyniku analizy cz

ę

sto wykluczaj

ą

mo

ż

liwo

ś

ć

identyfikacji analitów jedynie na podstawie czasu retencji.

●

Jedynie poł

ą

czenie mo

ż

liwo

ś

ci rozdzielania skomplikowanych

mieszanin przy wykorzystaniu metod chromatograficznych z
informacj

ą

strukturaln

ą

daje mo

ż

liwo

ś

ć

wiarygodnej identyfikacji

analitów.

●

Dzi

ę

ki wykorzystaniu technik ł

ą

czonych mo

ż

na w znacznym stopniu

przyspieszy

ć

i obni

ż

y

ć

koszty analiz dzi

ę

ki mniejszym wymaganiom

co do etapu przygotowania próbki do analizy.

WNIOSKI KO

Ń

COWE:

Technika

HPLC–MS

zaczyna by

coraz powszechniej stosowana w

laboratoriach analitycznych ze

wzgl du na jej zalety.

WNIOSKI KO

Ń

COWE:

Wkrótce technika LC-MS

mo e sta si technik rutynowych

analiz.