Poznawanie białek

Lista
2

I główny etap :

oczyszczanie

Wówczas możemy okreslić:



Sekwencję białka



Ewolucyje pokrewiństwo z
innymi białkami



Biochemczną funkcję

Etapy pracy:

Na każdym etapie oczyszczania

należy sprawdzić jego

skuteczność !!!



Pomiar aktywności specyficznej



Określenie wydajności przez

uwidocznienie białek techniką

elektroforazy

Białko należy wyizolować z

komórki

i oddzielić od organelli

komórkowych



Homogenizacja, także użycie
detergentu w celu
rozerwania błon
komórkowych

Techniki oczyszczania
białek:



Wirówanie różnicowe

Techniki oczyszczania
białek:



Precypitacja siarczanem
amonu



Dializa

Techniki oczyszczania
białek:



Chromatografia żelowa (wypełnienie kolumny: dekstran,

agaroza, poliakryloamid)

Techniki oczyszczania
białek:

Chromatografia
jonowymienna
(wypełnienie
karboksymetylo-
celuloza,dietylo-
aminoatyloceluloza)

Techniki oczyszczania
białek:



Chromatografia

powinowactwa



HPLC

Techniki oczyszczania białek

i wyznaczania ich masy

cząsteczkowej

:



Ultrawirowanie w gradięcie
gęstości

Rozdział, uwidocznienie i pomiar

masy cząsteczkowej białka:

Elektroforeza



Elektroforeza żelowa

Elektroforeza żelowa

SDS-PAGE...ozn. Masy
cząst.



Ruchliwość
łańcuchów
polipeptydowy
ch jest wprost
odwrotnie
proporcionalan
do logarytmu
ich masy
cząsteczkowej

Uwidocznienie prążków na
żelu:



Barwnik



Srebro



Western blotting

Ogniskowanie
izoelektryczne

Masowa
spektroskopia

Białka można anlizować i
oznaczać ilościowo stosując test
na podłożu stałym

NMR ujawnia strukturę

białek

w roztworze

Krystalografia ujawnia szczegóły
struktury białek na poziomie
atomowym

Przestrzenny rozkład gestości

elektronowej przedstawia się

w postaci szeregu

równoległych przekrojów ,

nakładanych jeden na drugi.

Sekwencjonowanie
białek

Sekwencjonowanie
białek:

Synteza peptydów: