2011-05-25
Konserwacja nasienia
W stanie płynnym >0oC W niskich temperaturach <0oC
Konserwacja nasienia knura,
PODSTAWOWA
inseminacja loch
METODA
KONSERWACJI
Dr hab. Wojciech Niżański
NASIENIA KNURA
!!!!
Konserwacja w stanie płynnym Konserwacja nasienia knura w stanie
płynnym
pobranie 2 frakcji nasienia metodą na rękę
przecedzenie, ocena
" EDTA: sól kwasu etyleno- di  amino
tetraoctowego, który cheletuje jony Ca++, Mg++ i
rozrzedzenie nasienia w stosunku od 1:1 do
1:7 rozrzedzalnikiem o tem. 33p C " Zn ++, jony uczynniajÄ…ce enzymy proteolityczne
" Rola innych skladnikow rozrzedzalników
-glukoza
wolne schładzanie mieszaniny do tem. śr 17 p C
przez ok. 4-5 godz.
-sole
-antybiotyki
przygotowanie dawek inseminacyjnych:
-&
objętośd: 50 -100 ml
koncentracja: 3-5 mld plemników o ruchu prawidłowym
Konserwacja nasienia knura w niskich temperaturach
Konserwacja nasienia knura w stanie
Metody:
płynnym - rozrzedzalniki
Ampułki
Składnik Pliszko I Pliszko II Merck
Tuby, plastikowe
Glukoza 60.00 60.00 53.68
słomki 0,5; 5 ml
EDTA 3.7 1.85 1.8
Pelety  kulki na suchym
Cytr sodu 10.00 1.5 3.3
lodzie
NaOH 4% 8.0 0.6 -
NaHCO3 - - 3.3
Streptom 0.5 0.5 -
Gentam - - 0.018
Aqua bidest 1000.0 1000.0 1000.0
tydzieo w temp
3 dni 15-18oC 6 dni 12-18oC
pokojowej
Inne: MRA, Androstar, Safecell, BTS
1
2011-05-25
Konserwacja nasienia knura w niskich temperaturach
Postępowanie w metodzie Hannower
rozrzedzalniki
Pobrad drugÄ… frakcjÄ™ plemnikowÄ… (metoda na
ROZRZEDZALNIK NR I Merck (modyfik)
rękę ) przecedzid, ocenid jakośd nasienia
substancja ilośd
Glukoza 53, 3
Cytrynian sodu dwuwodny 3, 6 g
EDTA (wersenian disodowy) 1,8
Do nasienia dodad rozrzedzalnik Merck
Na2HCO3 1,2
(l :2) w temperaturze 30 °C
Gentamycyna 0,018
H20 destylowana ad 1000 ml
ROZRZEDZALNIK nr II zimny
pozostawid w temp. pokojowej (20 °C) przez
substancja ilośd
1,5 h
11% laktoza 80%
żółtko jaja kurzego 20%
Rozrzedzalnik nr III
UmieÅ›cid mieszaninÄ™ w temp 15-18 ° C na kolejne 3 h
substancja ilośd
rozrzedzalnika nr II 92 ml
Odlad supernatant-
glicerolu 6 ml
Wirowanie  10 min/2 tys obr./min
zamrażarka!
Orvus Es Paste (detergent) 0,2 ml
Do osadu dodad rozrzedzalnik  zimny (nr 2)
Konserwacja nasienia knura w niskich temperaturach
Rozrzedzone nasienie pozostawid w temp,
Rozmrażanie
4-5 °C na 1,5 godz.
" Tuba do Å‚az
ni wodnej o temp. 50 °C na 40 sek.
Tuż przed mrożeniem dodad rozrzedzalnik nr 3,
tak aby koncentracja wynosiła 1,5 x 109 / ml
" Odciąd nasadę tuby, zawartośd zaaspirowad do
strzykawki wraz z 80 ml rozrzedzalnia Merck (w skład
którego wchodzi 30% osocza nasienia)
Napełnienie tub: 5- 6 ml nasienia
Mrożenie w parach ciekÅ‚ego azotu LN2 (-120 °C)
 20 minut
Zamrożenie w LN2(-196 °C)
Inseminacja loch Inseminacja loch:
Owulacja występuje 30-40 od pierwszych
Termin unasienniania:
objawów rujowych
24 h od objawów
tolerancji
Reinseminacja po 12  24 h
2
2011-05-25
Dawka inseminacyjna:
objętośd: 80 -100 ml, liczba plemników od 3 do 5 mld
Kateter inseminacyjny  GEDIS
Sztuczna inseminacja loch
Klasycznie-doszyjkowo Głęboka domaciczna
3
2011-05-25
Dawka: 3 miliardy plemników
Dawka: 1 miliard plemników Dawka: 150 milionów plemników
4