Moje notatki z ćwiczenia 4 oraz powtórka z 5, spisane no... hmn... Wiecie, byłam przekonana, że będą slajdy, też nie wiem o co mi chodziło w nk miejscach. Za błędy przepraszam-poprawcie!

Ab poliklonalne
Ab monoklonalne: zwierzę immunizuje się Ag i pobiera się od niego splenocyty (kom śledziony). Robi się hybrydę z nich i z kom szpiczaka (nowotworowe).
Hybrydy hodujemy, odseparowujemy te, które produkują nasze Ab i z tego otrzymujemy specyficzne przeciwciała monoklonalne.
Można je wyznakować.

Ag powierzchniowe
np. markery antygenów powierzchniowych kom T
używa się Ab przeciw Ag limfocytów T ???

Odczyn radiologiczny RIA (radioimmunoassay)
przeciwciało wyznakowane izotopem
1. przeciwciało niewyznakowane
2. antygamma globulin wyznakowana
wynik w czytniku gamma
metoda radioizotopowa- nie przetrzymuje się wyniku.

Odczyn immunofluorescencji
fluorochrom -znacznik fluorescencyjny
b. szybka metoda do 2h
b. czuła
wykrycie jakościowe i ilościowe
fluorochrom wyświeca się, przechowanie do 4 dni
znakowanie 1, 2 lub 3 stopniowe
fluorochrom FITC zielony
HEST niebieski (łączy się z DNA kom martwych, apoptotycznych)
??? czerwony (miała dać slajdy, więc nie notowałam b. dokładnie)
wątroba: preparat odciskowy
mrożeniowy (kroi kriostat)
parafinowy (kroi mikroton)
cytospinowy (na wirówkach cytospinowych)
barwienie:
utrwalenie np. 1/2 aceton, 1/2 metano
prep. parafinowy najlepiej odparafinować i zabarwić
odczyn immunofluor...(?)
mikroskop skaningowy- może wykonać jakościowy i ilościowy pomiar fluorescencji
cytometr przepływowy: liczy liczbę kom i dzieli na zawarte w tym wyznakowane i nie - analiza ilościowa

odczyn immunoenzymatyczny
przeciwciało znakowane enzymem, dodajemy substrat dla barwnej reakcji
peroksydaza chrzanowa
fosfataza alkaliczna
beta-galaktozydaza
ureaza (patrz. w slajdach od Zuzy lub Ewy, gdzieś powtórzył się ten slajd)

opłaszczenie Ag->przeciwciała-> płukanie->wyznakowane Ab przeciw Ab-> płukanie->substrat-> kolorek

dłuższa od fluorescencyjnej metod
wynik przechowywujemy latami

Westernblot na membranach

Ćw.5
Koniugat stała faza
Ab znakowane na Fc końcu
fluorochromem- in situ, skrawki mrozeniowe na szkiełkach, cytometr, metoda jakosciowa
immunoenzymatyczna- faza stała płytka, potrzebny substrat, metoda jakosciowa (np. test ciążowy), ilościowa
RIAMoje notatki z ćwiczenia 4 oraz powtórka z 5, spisane no... hmn... Wiecie, byłam przekonana, że będą slajdy, też nie wiem o co mi chodziło w nk miejscach. Za błędy przepraszam-poprawcie!

Ab poliklonalne
Ab monoklonalne: zwierzę immunizuje się Ag i pobiera się od niego splenocyty (kom śledziony). Robi się hybrydę z nich i z kom szpiczaka (nowotworowe).
Hybrydy hodujemy, odseparowujemy te, które produkują nasze Ab i z tego otrzymujemy specyficzne przeciwciała monoklonalne.
Można je wyznakować.

Ag powierzchniowe
np. markery antygenów powierzchniowych kom T
używa się Ab przeciw Ag limfocytów T ???

Odczyn radiologiczny RIA (radioimmunoassay)
przeciwciało wyznakowane izotopem
1. przeciwciało niewyznakowane
2. antygamma globulin wyznakowana
wynik w czytniku gamma
metoda radioizotopowa- nie przetrzymuje się wyniku.

Odczyn immunofluorescencji
fluorochrom -znacznik fluorescencyjny
b. szybka metoda do 2h
b. czuła
wykrycie jakościowe i ilościowe
fluorochrom wyświeca się, przechowanie do 4 dni
znakowanie 1, 2 lub 3 stopniowe
fluorochrom FITC zielony
HEST niebieski (łączy się z DNA kom martwych, apoptotycznych)
??? czerwony (miała dać slajdy, więc nie notowałam b. dokładnie)
wątroba: preparat odciskowy
mrożeniowy (kroi kriostat)
parafinowy (kroi mikroton)
cytospinowy (na wirówkach cytospinowych)
barwienie:
utrwalenie np. 1/2 aceton, 1/2 metano
prep. parafinowy najlepiej odparafinować i zabarwić
odczyn immunofluor...(?)
mikroskop skaningowy- może wykonać jakościowy i ilościowy pomiar fluorescencji
cytometr przepływowy: liczy liczbę kom i dzieli na zawarte w tym wyznakowane i nie - analiza ilościowa

odczyn immunoenzymatyczny
przeciwciało znakowane enzymem, dodajemy substrat dla barwnej reakcji
peroksydaza chrzanowa
fosfataza alkaliczna
beta-galaktozydaza
ureaza (patrz. w slajdach od Zuzy lub Ewy, gdzieś powtórzył się ten slajd)

opłaszczenie Ag->przeciwciała-> płukanie->wyznakowane Ab przeciw Ab-> płukanie->substrat-> kolorek

dłuższa od fluorescencyjnej metod
wynik przechowywujemy latami

Westernblot na membranach

Ćw.5
Koniugat stała faza
Ab znakowane na Fc końcu
fluorochromem- in situ, skrawki mrozeniowe na szkiełkach, cytometr, metoda jakosciowa
immunoenzymatyczna- faza stała płytka, potrzebny substrat, metoda jakosciowa (np. test ciążowy), ilościowa
RIA