II. Sterylizacja i dezynfekcja – część I - praktyczna Ćwiczenie1. Wyjaławianie ezy bakteriologicznej.
Za pomocą zapalarki zapalić palnik.
Ezę bakteriologiczną trzymać za koniec obsadki i wprowadzić pod kątem 450 w płomień
palnika. Eze opalać do momentu kiedy cały drucik będzie czerwony.
Poczekać aż eza wystygnie.
Ćwiczenie 2. Mikrobiologiczna kontrola skuteczności sterylizacji parą wodną w
autoklawie.
Oceny dokonuje się za pomocą specjalnych krążków nasyconych zawiesiną zarodników
określonego szczepu laseczek z rodzaju Bacillus (tzw. sporali A). Zarodniki te zdolne są do
przejścia w formę wegetatywną. Ponadto posiadają ściśle oznaczoną i powtarzalną
charakterystykę przeżywania w warunkach sterylizacji parą wodną pod zwiększonym
ciśnieniem.
1. Z opakowań wyjąć torebki papierowe z krążkami Sporal A i umieścić w różnych
miejscach komory autoklawu lub wewnątrz sterylizowanych materiałów.
2. Włączyć autoklaw (osoby posiadające uprawnienia do obsługi) i dokonać sterylizacji w
ciągu 20 minut w temperaturze nie mniejszej niż 1210 C.
3. Po zakończeniu sterylizacji przenieść krążki, z zachowaniem warunków jałowości, do
probówki z bulionem (użyć sterylnej pęsety).
4. Inkubować w odpowiedniej temperaturze przez 7 dni
5. W przypadku nieskutecznej sterylizacji w bulionie wystąpi zmętnienie, a na powierzchni
podłoża pojawi się kożuch z komórek bakterii. Jeżeli sterylizacja była skuteczna
bulion pozostanie klarowny.
Ćwiczenie 3. Badanie skuteczności działania promieniowania ultrafioletowego na
drobnoustroje obecne w powietrzu
Badanie obecności bakterii i grzybów w powietrzu przed włączeniem lampy UV:
1. Położyć dwie szalki Petriego z agarem odżywczym i dwie z podłożem Sabourauda w
pobliżu wyłączonej lampy UV i zdjąć wieczka z 1 szalki z Ao i 1 szalki z podłożem
Sabourauda na 10 minut.
2. Po 10 min. nałożyć wieczka i usunąć szalki, a na ich miejsce położyć nowe.
Badanie obecności bakterii i grzybów w powietrzu po włączeniu lampy UV:
3. Włączyć lampę UV na przynajmniej 30 minut.
Uwaga: nie przebywać w strefie działania promieni UV !
4. Po 30 minutach wyłączyć lampę i otworzyć szalki Petriego na 10 minut.
5. Po 10 minutach zamknąć szalki.
6. Opisać użyte szalki Petriego odpowiednio: „przed UV” i „po UV” i wszystkie
inkubować w temp. pokojowej przez tydzień.
Po okresie inkubacji policz wszystkie kolonie wyrosłe na płytkach z agarem odżywczym i
podłożem Sabourauda przed i po działaniu promieniowania UV. Postaraj się odróżnić
kolonie bakteryjne (zwykle wypukłe i kolorowe, lub płaskie i matowe) od grzybowych
(zwykle nitkowate, „watowate”).
Oceń skuteczność działania promieniowania UV i wyjaśnij, od jakich czynników ona
zależy. Które drobnoustroje są bardziej wrażliwe: bakterie czy grzyby ?
Ćwiczenie 4. Badanie skuteczności filtracji
1. Pobrać 1 oczko ezy podłoża przeznaczonego do sterylizacji i wykonać posiewu
murawkowego na ½ szalki z podłożem stałym (próbkę opisać: przed filtracją)
2. Sterylną pęsetą wyciągnąć filtr membranowy i umieścić go na sitku w obudowie filtra
3. Zamontować górną część obudowy filtr i podłączyć filtr do pompki wodnej
4. Wlać podłoże przeznaczone do sterylizacji i odkręcić kurek kranu w celu wywołania
podciśnienia
5. Po przefiltrowaniu podłoża zdemontować filtr, i pobrać sterylnie 1 oczko ezy filtratu,
po czym posiać go na drugiej połówce podłoża stałego (próbkę opisać: po filtracji)
6. Szalkę inkubować przez 48h w temperaturze 370C.
Po okresie inkubacji porównać wzrost w obu połówkach szalki i ocenić skuteczność
filtracji.