Aktywność enzymatyczna
Zadanie 1
Materiały:
Wyciąg z ziemniaków, 0,1 M bufor fosforanowy (pH=7,4), 0.3% r-r pirokatechiny
Wykonanie:
1. Do 4 ponumerowanych probówek dodać po 3 ml wyciągu z ziemniaka. Próbkę nr 3
wstawić na 5 min. do wrzącej łaz
ni wodnej, a następnie oziębić do temperatury
pokojowej. Następnie do wszystkich probówek odmierzyć podane w tabeli poniżej
ilości buforu fosforanowego i roztworu pirokatechiny lub wody.
2. Zawartość wszystkich probówek zmieszać, zanotować czas i pozostawić w
temperaturze pokojowej. Co kilka minut probówki nr 1-3 mocno wstrząsnąć dla
lepszego dostępu powietrza. Próbę nr 4 pozostawić bez wstrząsania (ograniczenie
dostępu tlenu). Wyniki odczytać i umieścić w tabeli po 30 min.
Numer próby Wyciąg z Woda (ml) Bufor Pirokatechina Wynik
ziemniaka (ml) fosforanowy (ml)
(ml)
1 3 0 0,5 1
2 3 1 0,5 0
3 3 0 0,5 1
4 3 0 0,5 1
3. Wyjaśnij otrzymane wyniki według następujących punktów:
a. Wskaż substrat reakcji. Jaką rolę w doświadczeniu odgrywa wyciąg z ziemniaka?
b. Wynik próby nr 1-komentarz
c. W jakim celu wykonujemy pozostałe próby?
Zadanie 2
Próba benzydynowa
Materiały:
Wyciąg z ziemniaków, odczynnik benzydynowy
Wykonanie:
1. Do 1 ml wyciągu z ziemniaków dodać kilka kropel świeżo przygotowanego
odczynnika benzydynowego. Niebieska barwa wskazuje peroksydazy.
2. Powtórzyć próbę na wyciągu ziemniaka uprzednio zagotowanym i oziębionym.
3. Wyjaśnij ewentualne różnice w obu barwach.
Zadanie 3
²-amylaza z nasion zbożowych
Materiały:
Wyciąg z nasion, płyn Lugola, 0,5% r-r skrobi, odczynnik Benedicta
Wykonanie:
1. Do 6 ponumerowanych probówek odmierzyć po 0,7 ml wody i 1 ml r-ru skrobi.
2. Do probówki nr 1 dodać 0,3 ml zagotowanego i oziębionego wyciągu z nasion, do
pozostałych po 0,3 ml niezagotowanego wyciągu z nasion, wymieszać. Zanotować
czas. Probówkę nr 2 nie inkubować (patrz tabelka), tylko od razu wstawić do wrzącej
Å‚az
ni wodnej na ok 5 minut w celu przerwania reakcji. Pozostałe probówki wstawić do
Å‚az
ni o temp. 37ºC na czas podany w tabelce.
3. Po czasie podanym w tabelce wyjmować kolejne probówki i dokładnie zagotować we
wrzÄ…cej Å‚az
ni wodnej (ok 5 minut). Oziębić, zawartość każdej z probówek podzielić na
2 części; w jednej przeprowadzić próbę Benedicta, natomiast w drugiej próbę Lugola.
4. Wyniki wpisać do poniższej tabeli oraz skomentować według pytań.
Numer próby Czas inkubacji (min) Próba Benedicta Próba Lugola
1 30
2 0
3 5
4 10
5 20
6 30
1. Wskaż substrat reakcji.
2. W jakim celu wykonane są próby Benedicta i Lugola. Odnieś to do swoich wyników.
Odnotuj zmianÄ™ w czasie.
3. Która próba jest próbą kontrolną i dlaczego?
Zadanie 4
Inwertaza z drożdży
Materiały:
R-r inwertazy, bufor octanowy (pH=4.4), r-r skrobi, r-r sacharozy, odczynnik Benedicta
Wykonanie:
1. Do 4 ponumerowanych probówek odmierzyć podane w tabeli ilości enzymu, wody,
buforu octanowego, r-ru skrobi, r-ru sacharozy.
2. W probówce nr 4 r-r enzymu zagotować przed dodaniem pozostałych składników.
3. Próby inkubować w temperaturze pokojowej przez 30 min.
4. Po tym czasie zawartość probówek zobojętniać r-rem węglanu sodu (wobec papierka
lakmusowego) i wykonać próbę Benedicta.
Nume Enzym Woda Bufor Skrobia Sacharoza Próba
r (ml) (ml) (ml) (ml) (ml)
Benedicta
próby
1 1 1 1 0 0
2 1 0 1 1 0
3 1 0 1 0 1
4 1 0 1 0 1
Wypełnij tabelę i po zapoznaniu się z właściwościami enzymu (biblioteka) omów
otrzymane wyniki i celowość użycia poszczególnych składników mieszaniny reakcyjnej.
Zadanie 5
Enzymatyczna hydroliza skrobi przez ą-amylazę śliny
Materiały:
1% roztwór skrobi, odczynnik Benedicta, ślina, płyn Lugola.
Wykonanie:
1. Do dwóch probówek dodać 3 ml roztworu skrobi i 1 ml śliny, zamieszać. Po 10
minutach wykonać próbę Benedicta oraz Lugola.
2. Powtórzyć doświadczenie używając śliny uprzednio zagotowanej.