Izolowanie mikroorganizmów z różnych
środowisk naturalnych
Cel ćwiczenia
" Izolowanie mikroorganizmów z wody i gleby na
stałe podłoża hodowlane
" Nauka metod posiewu na stałe podłoża hodowlane
Metody otrzymywania czystych kultur
" Metody bezpośrednie
" Metody pośrednie
Metody bezpośrednie
" Przy użyciu mikromanipulatora (zasysanie jednej
komórki mikroorganizmu)
" Metoda Lindnera (drożdże lub inne grzyby w kropli
wody na szkiełku nakrywkowym)
Metody pośrednie
" Metoda posiewu redukcyjnego
" Metoda posiewu powierzchniowego (płytki
 mazane )
" Metoda posiewu wgłębnego (płytki  lane )
" Metoda seryjnych rozcieńczeń
" Metoda replik (płytek odciskowych Lederberga)
Metoda posiewu powierzchniowego (płytki
 mazane )
" Przygotowanie odpowiedniego rozcieńczenia
" Wprowadzenie 0,1 ml zawiesiny z danego
rozcieńczenia na środek płytki z podłożem
agarowym
" Rozprowadzenie na powierzchni płytki przy pomocy
głaszczki szklanej wyjałowionej przez zanurzenie w
alkoholu i opalenie w płomieniu palnika
Schemat metody posiewu powierzchniowego
(płytki  mazane )
Izolowanie
z gleby
9 ml 9 ml 9 ml 9 ml
0,1 ml
0,1 ml 0,1 ml 0,1 ml
Schemat metody posiewu powierzchniowego
(płytki  mazane )
Izolowanie
z wody
0,1 ml 0,1 ml 0,1 ml 0,1 ml
Metoda posiewu wgłębnego (płytki  lane )
" Odmiana metody płytek  mazanych
" Z najwyższych rozcieńczeń pobiera się ilościowo
zawiesinę mikroorganizmów i dodaje do
upłynnionego schłodzonego podłoża w probówce
(10-12 ml)
" Po wymieszaniu całość wylewa się na sterylną
płytkę Petriego (po zastygnięciu wyrastają kolonie
wgłębne, denne i powierzchniowe)
Metoda seryjnych rozcieńczeń
" Służy do wyizolowania czystych hodowli z materiału
płynnego
" Polega na wielokrotnym rozcieńczaniu w celu
otrzymania w probówce jednej komórki
" Rzadko stosowana
Metoda replik (płytek odciskowych
Lederberga)
" Stosowana w badaniach genetycznych głównie
bakterii w celu rozróżnienia z mieszaniny
mikroorganizmów tych, które spełniają określone
właściwości
" Wysiew zawiesiny bakterii na zwykłe podłoże
agarowe
" Po wyrośnięciu pojedynczych kolonii przykładany
jest jałowy stempel pokryty welurem, do którego
przyczepiają się komórki, które następnie są
przenoszone na selektywne pożywki (wzrost tylko
komórek zdolnych do rozwoju na tym podłożu)
Obliczanie liczby mikroorganizmów w 1g
świeżej masy gleby lub 1 ml wody
D = K x R x O
D  ogólna liczba drobnoustrojów w 1g świeżej masy gleby lub
1 ml wody
K  średnia liczba kolonii na płytce Petriego
R  odwrotność rozcieńczenia, z którego wykonano posiew na
podłoże
O  współczynnik korygujący (uwzględniający przeliczenie
mikroorganizmów na 1 g gleby lub 1 ml wody, przy wysiewie
0,1 ml należy podstawić do wzoru 10)