Patrycja K膮kol 26.11.2012
Marta Sabat
Grupa:
Poniedzia艂ek,
godz. 1515
TEMAT : Dezintegracja
Cel 膰wiczenia
Zbadanie wp艂ywu ultrad藕wi臋k贸w na kom贸rki dro偶d偶y Saccharomyces cerevisiae.
Wykonanie 膰wiczenia
Materia艂y:
zawiesina dro偶d偶y Saccharomyces cerevisiae
roztw贸r D
roztw贸r 1M NaOH
odczynnik Folina-Ciocalteu鈥檃 rozcie艅czony 1:1
Sprz臋t:
dezintegrator ultrad藕wi臋kowy
spektrofotometr
wir贸wka
waga
艂a藕nia wodna
pipety, prob贸wki
prob贸wki wir贸wkowe
plastikowa zlewka 250 cm3
statyw do prob贸wek
Dezintegracja materia艂u biologicznego
1. Ustawiono w statywie 7 prob贸wek szklanych
2. Do pierwszej prob贸wki pobrano 4 cm3 zawiesiny dro偶d偶y, kt贸re nie by艂y poddane dezintegracji (czas t=0)
3. Do plastikowej zlewki 250 cm3 wprowadzono 200 cm3 zawiesiny dro偶d偶y Saccharomyces cerevisiae, a nast臋pnie naprowadzono koncentrycznie nad ni膮 i zanurzono ko艅c贸wk臋 robocz膮 dezintegratora
4. W艂膮czono zasilanie, ustawiono pi臋膰 cykli po 1 minucie oraz moc (15%0
5. Pobierano po 4 ml dezintegrowanej zawiesiny po ka偶dym cyklu do kolejnych prob贸wek (2-6)
6. Do si贸dmej prob贸wki (pr贸ba kontrolna) zamiast zawiesiny dodano 4 cm3 wody destylowanej
Oznaczenie ilo艣ci bia艂ka w badanych pr贸bach metod膮 Lowry鈥檈go
Do wszystkich prob贸wek dodano 3 cm3 1M NaOH i wstawiono do wrz膮cej 艂a藕ni wodnej na 10 minut, po czym odwirowano w prob贸wkach wir贸wkowych (3000 rpm, 5 min).
Przed wirowaniem prob贸wki zr贸wnowa偶ono
Nast臋pnie przeniesiono do prob贸wek po 2 cm3 supernatantu i dodano 5 cm3 roztworu D. Po 20 minutach dodano do ka偶dej prob贸wki 0,5 cm3 przygotowanego odczynnika Folina-Ciocalteu鈥檃, pozostawiono na 20 minut.
Dokonano pomiaru absorbancji przy d艂ugo艣ci fali 位=750 nm wobec pr贸by kontrolnej.
Wyniki 膰wiczenia
| t [min] | A700 | C [渭g/cm3] |
|---|---|---|
| 0 | 0,226 | 141,25 |
| 1 | 0,062 | 38,75 |
| 2 | 0,289 | 180,625 |
| 3 | 0,128 | 80,00 |
| 4 | 0,184 | 115,00 |
| 5 | 0,122 | 76,25 |
Ilo艣膰 bia艂ka C, zosta艂a odczytana z krzywej wzorcowej y=0,0016x.
Wykres zmian ilo艣ci bia艂ka w zale偶no艣ci od czasu dezintegracji:
Pomiary nie s膮 wiarygodne, poniewa偶 w pierwszej minucie obserwujemy znaczny spadek zawarto艣ci bia艂ka, natomiast w drugiej, gwa艂towny wzrost jego zawarto艣ci, nast臋pnie znowu spadek, wzrost i na ko艅cu spadek.
Wyznaczona linia trendu wskazuje tendencj臋 malej膮c膮 zawarto艣ci bia艂ka w stosunku do czasu dezintegracji, natomiast przy prawid艂owym odczycie, ilo艣膰 bia艂ka w zale偶no艣ci od czasu dezintegracji powinna rosn膮膰, poniewa偶 pod wp艂ywem ultrad藕wi臋k贸w uszkodzona zostaje 艣ciana kom贸rkowa zawieraj膮ca du偶e ilo艣ci bia艂ka. Wi膮zka ultrad藕wi臋kowa o odpowiedniej d艂ugo艣ci fali i cz臋stotliwo艣ci s艂u偶y do likwidowania nasion grzyb贸w i ple艣ni, jako 偶e dro偶d偶e s膮 grzybami, niemo偶liwe jest aby fale doprowadza艂y na zmian臋 do niszczenia ich kom贸rek i nast臋pnie do ich odbudowy czy rozmna偶ania.