Oczyszczanie lakazy z Cerrena Unicolor

Karolina Linowska, Katarzyna Lisowska, Jakub Knurek

1. Wstęp teoretyczny:

- słowo na niedzielę (o lakazie – czemu to taki ważny enzym?)

- po co właściwie nam lakaza? Jaki proces ona katalizuje?

- jakimi sposobami można oczyścić lakazę?

- czym jest aktywność enzymatyczna? Jaką aktywność wykazuje lakaza? (parametry środowiska)

- reakcja lakazy z syrngaldazynÄ… + opis

2. Omówienie stosowanej metody:

- chromatografia sitowa/ sączenie molekularne - jest mnóstwo artykułów i stron internetowych do opracowania tej tematyki

3. Wykonanie:

- opis żelu Sephadex G-25 (dlaczego właśnie on jest używany do odsalania białek?)

- jak i po co wykonuje siÄ™ kalibracjÄ™? (Blue Dextran/ dwuchromian potasu)

- zasada przygotowania buforów McIlvine’a (dlaczego wykonujemy tak dużo różnych buforów?)

- opis wykonania z uwzględnieniem zmienionych jednostek na ćwiczeniach (np. przy spektrofotometrze factor = 2564, interwał = 15 s, czas trwania pomiaru = 60 zamiast 120 s, długość fali – 525 nm, etc.)

- opis metody Leonowicz & Grzywnowicz – wystarczy wzór ze skryptu

- dlaczego używa się spektrofotometru i syryngaldazyny? (obserwacje)

- przypuszczalne wyniki oparte o źródła literaturowe

4. Wyniki:

- Tabela przedstawiająca aktywność w danym pH:

pH	Próbka nr I	Próbka nr II	Średnia wartość
3,5	- 27,39	- 1646,7	0
4,0	- 3212, 8	- 40,484	0
4,5	32258	54005	43131,5
5,0	47095	37864	42479,5
5,5	69117	70630	69873,5
6,0	71802	80716	76259
6,5	36821	39105	37963
7,0	11935	10659	11297

Wniosek: Optimum aktywności lakaza osiąga w ph 6,0.

- Wykres zależności aktywności lakazy od pH:

- Wydajność oczyszczenia:

pH	Próbka nr I	Próbka nr II	Średnia wartość	Opis
5,5	69117	70630	69873,5	Próbka oczyszczona
5,5	102720	74243	83481,5	Próbka nieoczyszczona

Próbka nieoczyszczona była rozcieńczana 50-krotnie i miała objętość 2 ul.

Próbka oczyszczona była rozcieńczana 10-krotnie i miała objętość 10 ul.

Wydajność oczyszczania (W) to wskaźnik, który pokazuje nam efektywność stosowanej metody. Określany jest on na 1 ml substancji o określonej aktywności z uwzględnieniem rozcieńczenia.

W = [(69873,5*10*10)/(83481,5*50*10)] * 100% = 6987350/41740750 * 100% = 16,74%

PS. Coś mały ten wskaźnik, ale błąd mógł się wkraść zarówno w trakcie pomiaru, jak i w obliczeniach. Uwzględniłem przeliczenie (*10) spowodowane błędem aparatu pomiarowego.