SPRAWOZDANIE

OZNACZANIE STĘŻENIA TRÓJGLICERYDÓW
enzymatyczny test kolorymetryczny, metoda GPO -PAP, reakcja końcowa

Do wykonania oznaczenia potrzebujemy:

• Tkankę tłuszczową

• Podłoże Eagle’a

• Pipety

• Pipeta automatyczna z zmiennymi końcówkami

• 50 um insuliny

• 50 um kortyzolu 20%

• 50um lipazy

• Czyste probówki

• Płytka titracyjna

• Łaźna parowa

• Odczynnik z zestawu TG

WYKONANIE:

Wydzielamy 4 kawałki tkanki tłuszczowej i umieszczamy je w zagłębieniach płytki titracyjnej. Zawartość trójglicerydów w zagłębieniach wynosi:
1) 0,132 g
2) 0,096 g
3) 0,121 g
4) 0,146 g
Do kawałków tkanki tłuszczowej dodajemy 1ml podłoża Eagle’a, następuje 10minutowy okres inkubacji. Następnie dodajemy za pomocą pipety automatycznej:

• Numer 1 – nic, jest to próba kontrolna

• Numer 2 – insulina (50um)

• Numer 3 – kortyzol 20% (50um)

• Numer 4 – lipaza (50um)
  Po dodaniu w/w następuje 20 minutowy okres inkubacji w temperaturze wyższej o 1C ( naszym wypadku było to przeniesienie płytki na parapet )
  W międzyczasie oznaczamy puste probówki oraz za pomocą pipety automatycznej odmierzamy po 1ml odczynnikaTG do każdej z probówek. Probówki z odczynnikiem zanosimy do łaźni parowej .
  Następnie do probówek z odczynnikiem dodajemy po 1ml każdej z próbek z płytki titracyjnej, zamieszać i zanosimy do łaźni parowej na 5 minut.
  Odczytujemy wyniki za pomocą spektrofotometru. Nasilenie koloru odpowiada stężeniu trój glicerydów przy długości fali 540nm.

Obliczenia
Wzór zastosowany : TG = $\frac{\text{Epr}}{\text{Enz}}$ * stężenie wzorca
1)Kontrola 25,39 mg/dl
2)Insulina 89,242 mg/dl
3)Kortyzol 16,90 mg/dl
4)Lipaza  11,060 mg/dl

Porównanie wyników z normami, komentarz
1) Próba kontrolna – 315,15 g/dl – w odniesieniu do niej będziemy komentować otrzymane wyniki.
2) INSULINA – 69,7mg/dl ????
Insulina jest hormonem białkowym stymulującym wzrost tkanki tłuszczowej. Insulina ma działanie anabolityczne (syntezy) nasilające proces wytwarzania glikogenu, białek i tłuszczy.

3) Kortyzol –221,21 mg/dl - pod wpływem kotyzolu nastąpiło zmniejszenie się tkanki tłuszczowej. Dzieje się tak, ponieważ kortykosteroidy regulujące przemiany białek i tłuszczy niwelują tkankę tłuszczową. Inicjuje osadzanie blaszek miażdżycowych w naczyniach krwionośnych.

4) Lipaza – 106,06mg/dl – lipaza jest enzymem przeprowadzającym hydrolizę tłuszczy do glicerolu i kwasów tłuszczowych.