kwasy nukelinowe 15

LABORATORIUM Z BIOCHEMII

Kwasy nukleinowe.

Kwasy nukleinowe należą do podstawowych składników komórek zwierzęcych, roślinnych i drobnoustrojów. Są wielocząsteczkowymi polimerami nukleotydów.

Rozróżnia się:

β - D- rybofuranoza 2 – detoksy – β - D- rybofuranoza

NUKLEOTYD – podstawowa jednostka strukturalna kwasów nukleinowych, składa się z zasady azotowej (purynowej lub pirymidynowej), składnika cukrowego – pentozy (rybozy lub deoksyrybozy) oraz kwasu ortofosforowego.

Do podstawowych zasad azotowych występujących w kwasach nukleinowych należą adenina, guanina, cytozyna, uracyl i tymina.

Zasady purynowe: Ade, Gua. Zasady pirymidynowe: Cyt, Ura, Thy.

Połączenie zasady azotowej ze składnikiem cukrowym nosi nazwę NUKLEOZYDU. W nukleozydach wiązanie glikozydowe łączy C-1 pentozy z atomem N-1 zasady pirymidynowej lub atomem N-9 zasady purynowej.

NUKLEOZYD - połączony wiązaniem estrowym z resztą kwasu ortofosforowego tworzy nukleotyd.

Kwas rybonukleinowy (RNA) jest skupiony w komórkach głównie w rybosomach, a kwas deoksyrybonukleinowy (DNA) przede wszystkim w jądrze komórkowym.

Większość kwasów nukleinowych występuje w kompleksach z białkami, czyli w formie NUKLEOPROTEIN. Łagodne postępowanie umożliwia izolowanie takich połączeń, jednak już w roztworach stężonych soli, nukleoproteiny dysocjują na kwasy nukleinowe i białka.

Wolne kwasy nukleinowe dobrze rozpuszczają się w środowisku zasadowym, słabo w wodzie, rozcieńczonych kwasach i alkoholach. Obecność kwasy fosforowego nadaje tym związkom charakter kwaśny.

DNA można odróżnić od RNA na podstawie analizy składnika cukrowego.

Reakcją ogólną na wykrycie pentoz jest reakcja orcynolowa Biala, do odróżniania obu pentoz stosuję się reakcję DISCHIEGO z difenyloaminą. Reakcje te są wykorzystywane w analizie ilościowej kwasów nukleinowych.

Zasady purynowe i pirymidynowe tworzą sole zarówno z kwasami, jak i z jonami metali.

Zasady purynowe zawarte w kwasach spożywanych produktów w obecności swoistych enzymów są utleniane poprzez hipoksantynę i ksantynę do kwasu moczowego, który wydalany jest z organizmu z moczem.

Zaburzenia w przemianie puryn odgrywają dużą rolę w powstawaniu takich zmian patologicznych jak dna (podagra), artretyzm, kamica moczanowa.

1. Rozpuszczalność kwasów nukleinowych.

Wytrącanie się osadu po dodaniu do probówek HCl z roztworami DNA i RNA wynika z tego, że kwasy wykazują bardzo niską rozpuszczalność w środowiskach kwaśnych. Kwasy nukleinowe wykazują odczyn kwaśny.

Rozpuszczanie osadu po dodaniu do próbek z roztworem DNA i RNA NaOH wykazuję na to, że kwasy dobrze rozpuszczają się w zasadach.

2. Kwaśna hydroliza kwasów nukleinowych.

Kwasy DNA i RNA pod wpływem ogrzewania w H2SO4 ulegają hydrolizie do wolnych zasad purynowych i nukleotydów pirymidynowych.

3. Wykrywanie pentoz w hydrolizach kwasowych.

Reakcja orcynolowa:

Zawarte w nukleozydach pentozy ogrzewane w środowisku kwaśnym ulegają odwodnieniu przechodząc w furfural, który w wyniku kondensacji z orcyną i jonami żelaza tworzy zielone kompleksy

Reakcja Dischego:

Deoksyryboza wolna i związana w reakcji z odczynnikiem difenylowym ulega odwodnieniu pod wpływem działania kwasu octowego zawartego w odczynniku, przechodząc w formę aldehydu ω- hydroksylewulinowego, potem tworzy barwny kompleks z difenyloaminą.

Wykrywanie kwasu fosforowego:

Po podgrzaniu próbek wytrącił się żółty osad, co świadczy o obecności fosforanów. Wytrącenie się osadu świadczy o utworzeniu trudno rozpuszczalnej soli fosfomolibdenianu amonu oraz o obecności reszt kwasu fosforowego w kwasach nukleinowych.

4.Wykrywanie zasad purynowych (adenina, guanina).

Wytrącił się nierozpuszczalny w amoniaku biały osad soli srebrowych puryn. Zasady purynowe zawarte w kwasach nukleinowych tworzą sole z jonami metali.

5. Oznaczenie zawartości zasad purynowych metodą spektrofotometryczną

Najlepsza kostka ta, która zawiera najmniej zasad purynowych.

6.Oznacznie zawartości DNA metodą difenyloaminową.

Deoksyryboza będąca składnikiem DNA z odczynnikiem difenyloaminowym zawierający stężony kwas octowy daje niebieskie zabarwienie, którego natężenie jest proporcjonalne do ilości DNA w próbie.


Wyszukiwarka

Podobne podstrony:
kwasy nukelinowe 2015
Aminokwasy Aminy Kwasy nukelinowe Białka
KWASY NUKLEINOWE 15
kwasy nukelinowe 2015
przez 15 KWASY KARBOKSYLOWE2
Biochemia Wykład VII 9 01 15 r Kwasy nukleinowe, DNA, RNA
ALOTROPIA, KWASY, ZASADY,SOLE, AMFOTERY, KOMPLEKSY, INNE ZWIĄZKI NIEORGANICZNE 11 (15 11)
15 Kwasy karboksylowe(1)
chorg w 15 zasady kwasy
przez 15 KWASY KARBOKSYLOWE2
przez 15 KWASY KARBOKSYLOWE2
wyklad 14 15 2010
wyklad badania mediow 15 i 16
15 ROE

więcej podobnych podstron