POLITECHNIKA ŚLĄSKA

Sprawozdanie z zajęć laboratoryjnych z biochemii nr 9

„Wyznaczanie parametrów kinetyki reakcji enzymatycznej za pomocą metod polarymetrycznych”

Wykonała sekcja 3 (gr.3, sem. 5, biotechnologia) w składzie:

Biskup Aneta

Draus Tomasz

Kołodziej Krzysztof

Łagocki Lech

23.12.2010r.

1. Cel ćwiczenia

Celem ćwiczenia było wyznaczenie kinetyki reakcji enzymatycznej hydrolizy sacharozy przez inwertazę dla różnych stężeń roztworu wyjściowego.

2. Przebieg ćwiczenia

Przygotowano 100 ml 4% roztworu sacharozy poprzez wsypanie 4 g sacharozy do kolby miarowej, wlanie 100 ml buforu octanowego i wymieszanie. Do kolejnych 2 kolb przelano 50 ml i 25 ml roztworu 4 % i dopełniono do 100 ml wodą, otrzymując w ten sposób stężenia 2% i 1 %.

Do kolby zawierającej 4% roztwór dodano 0,1 ml roztworu inwertazy, wymieszano i przelano do rurki polarymetrycznej, dbając o dokładne wypełnienie rurki (brak pęcherzyków powietrza). Następnie przystąpiono do pomiaru kąta skręcenia z wykorzystaniem polarymetru. Cyfry na zewnętrznym półokręgu określały liczbę całkowitą i kierunek kąta skręcalności, a gdy kreski przy cyfrach na wewnętrznym półokręgu pokrywały się z kreskami cyfr na zewnętrznym półokręgu to liczba z wewnętrznego półokręgu określała cyfrę po przecinku w kącie skręcalności. Pomiary powtórzono po 2, 4, 6, 8 i 10 minutach.

Doświadczenie powtórzono dla roztworów 2% i 1%. Wyniki zanotowano w tabeli.

3. Wyniki

4 g / 100 ml
Czas [min]
0
2
4
6
8
10

2 g / 100 ml
Czas [min]
0
2
4
6
8
10

1 g / 100 ml
Czas [min]
0
2
4
6
8
10

4. Dyskusja wyników i obserwacje

1) obliczenia

Aby obliczyć stężenie substratu Cs w danym czasie skorzystano z wzoru :

$$C_{s} = \ \frac{1,16\ \ \alpha}{l} + \ 0,23\ \ C_{0}$$

Gdzie :

α- kąt odczytany za pomocą polarymetru

l – długość rurki polarymetrycznej [dm], która wynosiła 20 cm czyli 2 dm

C₀ – odpowiednie stężenia początkowych roztworów [g/100 ml]

2) wykresy

• C₀ – Cs od czasu

• Lineweavera – Burka ( 1/v od 1/Cs)

• Michaelisa-Menten ( v od Cs?)

5. Wnioski

K_m wynosi

V_max wynosi