Ćwiczenie 2: Wykrywanie aminokwasów

Przy pomocy poniższych reakcji zidentyfikowałyśmy aminokwasy znajdujące się w oznaczonych probówkach.

1. Reakcja ninhydrynowa

Odczynniki:

-roztwór badany

- 0,1% roztwór ninhydryny rozpuszczonej w mieszaninie etanolu i wody (1:1)

Wykonanie:

Do probówki wprowadziłyśmy 1 cm3 roztworu badanego, a następnie 0,5 cm3 roztworu ninhydryny. Próbkę ogrzałyśmy do wrzenia w łaźni wodnej.

Wniosek:

Reakcja ninhydrynowa jako ogólna reakcja służąca do wykrywania aminokwasów wskazała nam, który z roztworów badanych nim nie jest, ponieważ jedna substancja nie zmieniła swojego koloru po ogrzaniu i pozostała bezbarwna. Oznaczało to, że był to roztwór zawierający wodę – probówka 1/8. Pozostałe badane roztwory zmieniły zabarwienie w wyniku kondensacji 2 cząsteczek (zredukowanej i utlenionej) ninhydryny z amoniakiem.

1. Reakcja cystynowa

Odczynniki:

- roztwór badany

- wodny roztwór NaOH o stężeniu 20%

- wodny roztwór octanu ołowiu(II) o stężeniu 2%

Wykonianie:

Do 1 cm3 roztworu badanego dodałyśmy 1 cm3 roztworu wodorotlenku sodu i parę kropli octanu ołowiu(II). Wstawiłyśmy do wrzącej łaźni wodnej na 2-3 minuty.

Wniosek:

Po czasie 2-3 minut jeden z roztworów badanych zmienił zabarwienie pod wpływem zajścia reakcji między octanem ołowiu(II), a siarką zawartą w aminokwasie. Oznaczało to, że w probówce 4/8 znajdował się aminokwas siarkowy.

1. Reakcja ksantoproteinowa

Odczynniki:

- roztwór badany

- mieszanina stężonego kwasu azotowego i stężonego kwasu siarkowego (1:3)

- wodny roztwór NaOH o stężeniu 30%

Wykonanie:

Do probówki wprowadziłyśmy 1 cm3 roztworu badanego i dodałyśmy 0,5 cm3 mieszaniny kwasów. Ogrzewałyśmy w przez 30 sekund. Po ostudzeniu wprowadziłyśmy 1,5-2 cm3 wodorotlenku sodu.

Wniosek:

*Po wprowadzeniu wodorotlenku sodu roztwór uległ wzburzeniu oraz gwałtownemu ogrzaniu, wytwarzając pęcherzyki gazu. Ostatecznie otrzymałyśmy blado cytrynową barwę roztworu bez brunatnych oparów. Świadczyło to o tym, że w roztworze 3/8 jest obecny aminokwas aromatyczny.

* Przy sąsiednim stanowisku została przeprowadzona reakcja, w której zamiast wodnego roztworu NaOH został dodany roztwór NaNO2 (azotanu (III) sodowego). W wyniku tego na ściankach probówki zaobserwowaliśmy wydzielanie żółto-pomarańczowych oparów tlenku azotu, natomiast roztwór badany zmienił zabarwienie na jasnoniebieskie.