Grupa 5

Elżbieta Pidek
Aleksandra Sotniczuk
Marta Makar
Karolina Rabińska
Agnieszka Wyska
Magdalena Świątkowska

Sprawozdanie

z dnia 29.11.2012

Temat: Analiza bakteriologiczna wody do celów sanitarnych.

Cel i zakres badań

Określenie przydatności do spożycia wody wodociągowej oraz użyteczności do celów rekreacyjnych wody powierzchniowej przy pomocy analizy posiadanych próbek.
Zakwalifikowanie próbki wody powierzchniowej do określonej klasy czystości oraz zbadanie przydatności do spożycia wody wodociągowej poprzez zbadanie ogólnej liczby bakterii mezofilnych i psychrofilnych oraz bakterii grupy coli.

Sposób wykonania badania:

1)Określanie przydatności do spożycia wody wodociągowej.

Aby określić przydatność do spożycia wody wodociągowej określano całkowitą liczbę bakterii E. coli i całkowitą liczbę paciorkowców kałowych w 100 cm³ wody oraz liczbę bakterii mezofilnych i psychrofilnych w przeliczeniu na 100 cm^3.

W obu przypadkach wykorzystano metodę filtrów membranowych.

1. Określanie całkowitej liczby bakterii E.coli w 100 cm³:
   - przefiltrowano 100 cm³ pobranej wody przez filtr

- filtr umieszczono w płytkach, na powierzchni podłoża selektywnego z laktozą, TTC i tergitolem
- tak przygotowaną hodowlę inkubowane w temperaturze 37⁰C przez 24 godziny
-uzyskane wyniki obrazuje tabela 1

1. Określenie całkowitej liczby paciorkowców kałowych w 100cm³:
   - przefiltrowano 100 cm³ pobranej wody przez filtr

- filtr umieszczono w płytkach, na powierzchni podłoża selektywnego z glukozą, TTC i azydkiem sodu
- tak przygotowaną hodowlę inkubowane w temperaturze 37⁰C przez 48 godzin
-uzyskane wyniki obrazuje tabela 1

Po upłynięciu czasu inkubacji próbki przeniesiono do lodówki, po czym w terminie przeprowadzanych zajęć grupa mogła przeanalizować zmiany, które powinny były zajść w hodowli. Zmian nie stwierdzono. W przypadku hodowli E.coli nie wykryto najmniejszych śladów żółtych kolonii oraz żółtego zabarwienia filtru, przez co określono liczbę bakterii E.coli jako 0. W przypadku hodowli paciorkowców kałowych nie doszukano się na filtrze ciemnoczerwonych kolonii, co świadczy również o braku ich występowania.

	100 ml
E. coli	0
Paciorkowce kałowe	0

Tabela 1: Otrzymane wyniki dla wody wodociągowej.

Równolegle określano liczbę bakterii mezofilnych i psychrofilnych w przeliczeniu na 100 cm³ wykorzystując do tego metodę płytkową Kocha.

Wykonywano posiewy głębinowe z objętości 1ml oraz 0,1 ml na agar odżywczy płynny.

Wyniki zamieszczono w tabeli 2.

	1 ml	0,1 ml
Bakterie mezofilne	1	0
Bakterie psychrofilne	1	0

Tabela 2: Otrzymane wyniki dla wody wodociągowej.

Poniżej zamieszczono normy, które powinna spełniać woda użytkowa przeznaczona do spożycia przez ludzi.

Lp.	Wskaźnik jakości wody	Najwyższa dopuszczalna wartość wskaźnika w próbce wody pobranej w miejscu czerpania przez konsumentów i/lub podawania wody do sieci
		liczba bakterii
1	Escherichia coli lub bakterie grupy coli typ kałowy (termotolerancyjne)	0
2	Bakterie grupy coli	0
3	Enterokoki (paciorkowce kałowe)	0
4	Clostridia redukujące siarczany (Clostridium perfringens)	0
5	Ogólna liczba bakterii w 37C po 48h	50
6	Ogólna liczba bakterii w 22C po 72h	100

Tabela 3: Wymagania mikrobiologiczne jakim powinna odpowiadać woda przeznaczona do spożycia przez ludzi.

2) Określenie użyteczności wody powierzchniowej do celów rekreacyjnych.
Określano ogólną liczbę bakterii mezofilnych i psychrofilnych oraz liczbę bakterii E.coli oraz paciorkowców kałowych.

1. Określanie liczebności kolonii E. coli w badanej wodzie powierzchniowej. Wykorzystano metodę fermentacyjną probówkową:

-Wykonano szereg rozcieńczeń od wielkości 10⁰ do 10^-5

-Do płynnego podłoża laktozowego z purpurą bromokrezolową oraz rurkami Durhama umieszczano po 1 cm³ wody z każdego rozcieńczenia. Wykonano 2 serie zaszczepień.

-Próbki inkubowano w temperaturze 37⁰C przez 24 godziny

-Po czasie inkubacji zauważono w niektórych próbkach zmętnienie, gaz w rurce Durhama oraz zmianę zabarwienia z fioletowego na żółte

-Dla wybranych próbek wykonano badanie potwierdzające metodą testu szybkiego (2 serie):

*1)Odpowiednie rozcieńczenia aplikowano na podłoże laktozowe z żółcią i zielenią brylantową. Inkubowano przez 24 godziny w temperaturze 44⁰C.

*2)Odpowiednie rozcieńczenia aplikowano do wody peptonowej z tryptofanem. Inkubowano próbki przez 24 godziny w temperaturze 44⁰C.

Zmiany po przebytej inkubacji zaobserwowano dla rozcieńczeń 10⁰ oraz 10¹ . W przypadku podłoża laktozowego z żółcią i zielenią brylantową obserwowano obecność gazu w rurce Durhama oraz zmętnienie. W przypadku wody peptonowej z tryptofanem po dodaniu odczynnika Ehrlicha- Bohma można było zaobserwować wyraźny różowy pierścień. Oba te badania potwierdzają obecność bakterii E. coli w badanych próbkach.

Analizując otrzymane wyniki przystąpiono do określenia miana oraz NPL dla badanej wody posługując się specjalnie do tych celów wyliczonymi tabelami¹. Po przeliczeniu na wartości badane wyniki umieszczono w tabeli 4.

	10^0	10^−1	10^−2	10^−3	10^−4	10^−5	MIANO/NPL 100 ml
Badanie wstępne	+ +	+ +	- -	- -	- -	- -	0,04/2400
Podłoże laktozowe z żółcią i zielenią brylantową	+ +	+ +	- -	- -	- -	- -
Woda peptonowa z tryptofanem i odczynnikiem E-B.	+ +	+ +	- -	- -	- -	- -

Tabela 4: Wyniki badania wody powierzchniowej na obecność E. coli.

NPL- najbardziej prawdopodobna liczba

1. Określenie całkowitej liczby bakterii mezofilnych i psychrofilnych w wodzie powierzchniowej.
   Wykonywano posiewy głębinowe metodą płytkową Kocha. Badano rozcieńczenia od 10^-1 do 10^-3

Wyniki zamieszczono w tabeli 5

Wskaźnik	Liczba kolonii w rozcieńczeniu
	10^−1
Bakterie mezofilne	np
Bakterie psychrofilne	np

Tabela 5: Wyniki badania wody powierzchniowej na ogólną liczbę bakterii mezofilnych oraz psychrofilnych.

JTK- jednostki tworzące kolonię

1. Określono liczbę paciorkowców kałowych za pomocą filtrów membranowych:
   -przefiltrowano 5 cm³ pobranej wody przez filtr

- filtr umieszczono w płytkach, na powierzchni podłoża selektywnego z glukozą, TTC i azydkiem sodu
- tak przygotowaną hodowlę inkubowane w temperaturze 37⁰C przez 48 godzin
-uzyskane wyniki obrazuje tabela 6

Paciorkowce kałowe
1.
2.

Tabela 6: Wyniki badania wody powierzchniowej na obecność paciorkowców kałowych.

Poniżej zamieszczono normy, które powinna spełniać woda użytkowana do celów rekreacyjnych.

Ocena bieżąca jakości wody w kąpielisku i miejscu wykorzystywanym do kąpieli
Wymagania mikrobiologiczne
Lp
1
2

Wnioski:

Analizując otrzymane wyniki możemy stwierdzić, iż woda wodociągowa spełnia wymagania zawarte w Rozporządzeniu z dnia 20 kwietnia 2010 roku, co oznacza, że nadaje się do bezpiecznego spożycia przez użytkownika

Woda powierzchniowa jednakże przekracza dopuszczalne normy w przypadku paciorkowców kałowych ( 520 przy dopuszczalnej liczbie 400) oraz E.coli ( 2400 przy dopuszczalnej liczbie 1000). Stwierdzamy więc, że badana woda nie nadaje się do celów rekreacyjnych. ¹

---

1. 1. „Wartości najbardziej prawdopodobnych liczb (NPL) bakterii w 100 cm3 próbki” s. 125
   Ćwiczenia laboratoryjne z biologii sanitarnej Z. Kańska, A. Grabińska-Łoniewska, M. Łebkowska, E. Rzechowska↩