Oznaczanie ogólnej ilości bakterii w wodzie wodociągowej

- do 3 płytek pietriego wprowadzić po 1cm3 wody nierozcieńczonej, zawartość płytek zalać ostudzonym do ok.50st. agarem odżywczymi wymieszać ich zawartość. Po zastygnięciu płytki wstawić odwrócone do góry dnem do cieplarki i inkubować w 32st. Następnie sporządzić rozcieńczenie badanej wody 10-1. Do kolejnych 3 plytekpetriego wprowadzić po 1cm3 wody rozcieńczonej,i tak jak wyżej po czym obliczyć il bakterii w 1cm3 badanej próby.

Oznaczanie ogólnej ilości bakterii w mleku

-mleko otrzymane do badań wymieszać w celu ujednolicenia zawartości naczynia i rozprowadzenia baterii w całej objetosci badanej proby.

-z trzymanego mleka sporządzić dwa kolejne rozcieńczenia 10-1 i 10-2

-do 2 plytekpetriego wprowadzić po 1cm3 rozcienczenia 10-1, zalac upłynnionym agarem spożywczym i wymieszać

- to samo z rozcienczniem 10-2 i po zastygnięciu wszystkie plytki wstawić do cieplarki odwrócone dnem do góry i inkubować w 30st przez 72h.

Analiza mikrobiologiczna powierzchni metodą odciskową i tamponową

-płytkę petriego z zestalonym podłożem podzielić, rysując pisakiem kreskę na spodzie plytki. Na jednej połowie plytki wykonać odcisk palca tak by nie niszczyc powierzchni podloza.

-jałowy tampon z waty zamoczyć w zlewce z woda destylowana, odcisnąć nadmiar płynu o scianki naczynia i przeciągnąć po badanej powierzchni.

-na drugiej polowieplytki wykonać posiew rysując tamponem na powierzchni zestalonego podloza linie falista. Płytkepetriego z podlozem inkubować w cieplarce w temp 30

!!
Do sporządzenia rozcieńczeń stosuje się roztwor fizjologiczny soli kuchennej, płyn ringera, wyjałowioną wodę destylowaną i roztwor cytrynianu sodowego.

Metody pośredniego liczenia komórek

-metoda filtrów membranowych: bada się plyny o malym stopniu zakazenia( woda wodociagowa, wino, soki, napoje). Przez filtr membranowy przepuscza się okreslonaobjetosc badanej proby. Następnie filtr umiescza się na podlozustalym w plytcepetriego i inkubuje w termostacie. Substancje odżywcze z podloza przenikają przez pory filtru, umozliwiajac wzrost kolonii zatrzymanych na filtrze drobnoustrojow. Ilość wyrosłych kolonii jest podstawa do obliczenia ilkomorek występujących w określonej objetosci badanego produktu.

-metoda filtracji przez wode- jest stosowana do oznaczenia stopnia zakazenia powietrza. Okreslonaobjetosc powietrza przepuszcza się przez jałowa wode znajdującą się w aspiratorze. Z wody tej dokonuje się następnie posiewow na podloza stałe.

-Metoda sedymentacyjna Kocha-polega na eksponowaniu w badanym pomieszczeniu plytekpetriego z zastygłym podlozem agarowym przez czas 5,10,15 min, koch stwierdził ze na powierzchni 100cm2 w ciągu 5min osiada tyle komorek, ile wystepuje w 10dm3 powietrza. Il drobnoustrojow w 10dm3 powietrza: x=a(sril kolonii przypad na 1 plytke) *100/b(powplytki)*k(wspolczynnik czasu ekspozycji)

Oznaczenie miana coli w wodzie

-z otrzymanej probki wody sporzadzic jedno rozcieńczenie 10-1, do 2 probowek zawierających po 10cm3 normalnego podlozaeijkmana wprowadzić odpowiednio 1cm3 wody nierozcieńczonej oraz 1cm3 rozcienczenia. Do 10 probowek zawierających podwojne stężenie po 10cm3 podlozeeijkmana wprowadzić po 10cm3 nierozcienczonej wody. Posiewy inkubować 48h w 37st

Oznaczenie miana enterokoków

-z trzymanej probysporzadzic 5 kolejnych rozcienczen, z poszczególnych pieciurozcienczen wprowadzić po 1cm3 do kolejnych probowek z plynnympodlozem z azydkiem sodowym i fioletem krystalicznym, posiewy inkubować w 37st przez 2doby. O obecności enterokokowswiadcza zmętnienie podloza i zmiana jego zabarwienia na zoltawe.

Liczenie komórek drożdży w komorze thoma

-znalezc w mikroskopie siatkę komory thoma, z otrzymanej zawiesiny drozdzysporzadzic rozcieńczenie 10-1, po dokładnym wymieszaniu rozcieńczenia sporzadzic na siatce komory thoma preparat w kropli spłaszczonej, w mikroskopie pod obiektywem powieksajacym 40x policzyć ilość komorekdrozdzy w całej komorze. Ilość drozdzy w 1cm3 zawiesiny: x=a(srilkomorekprzyp na maly kwadrat)*b(ewentualne rozcieńczenie badanej proby)*1000*400

Metody bezpośredniego liczenia komorek

-komora thoma

-metoda filtrow membranowych- stosowana dolicenia ilości bakterii, przez odpowiednio zabarwiony filtr membranowy fuksyna przasacza się 1cm3 badanej proby, filtr przepłukuje się roztworem zasady sodowej i nalewa roztworblekitutoluidynowego i saczy. Filtr wyjęty z oprawy suszy się i umieszcza na szkiełku przedmiotowym, oglada pod imersja. Ilość komorek w 1cm3 badanej proby= l. bakterii/ l. pol widzenia*wspolczynnik * rozcieńczenie

Oznaczenie miana

Miano- określa najmniejsza objetosc lub mase produktu, w której stwierdzono jeszcze obecność badanych drobnoustrojow.

Miano coli-okreslastopienzakazeniapaleczkami z grupy okrężnicy. Obecność bakterii coli swiadczy o możliwości zanieczyszczenia kalowego. Do oznaczania miana coli stosuje się plynnepodloza wybiorcze.

Miano enterokokow- ma jeszcze większe znaczenie przy ocenie stanu higienicznego produktów spożywczych, ich obecność w produktach swiadczy o zakazeniukalowym. Bakterie te sa bardziej oporne na działanie czynnikow zew. Fizykochemicznych niż paleczki z grupy okrężnicy. Rosna dobrze na zwykłych podlozach a ich duza oporność umozliwia stosowanie wielu podlozy wybiorczych, hamujacyh wzrost innych drobnoustrojow.

Hodowle drobnoustrojow w zaleznosci od ich stosunku do tlenu

=aspergillus Niger: - hodowla statyczna w podlozuplynnym, w kolbie stożkowej w 30st: -ezewyzarzyc w plomieniupalnika,zanurzyćeze w podlozu w kolbie w celu jej schłodzenia i zwilżenia, pobrać zarodniki plesni z plytkipetriego, dotykając oczkiem ezy w podlozu w kolbie stożkowej kilka razy, ezewyzarzyc w plomieniu palnika, kolbe z podlozemunkubowac w cieplarce w 30st.

-hodowla wstrzasana w podlozuplynnym w kolbie stożkowej w30st (jak wyżej)

=sacharomycescerevisiae –hodowla statyczna w podlozuplynnym w kolbie stożkowej w 30st: -jalową pipeta pobrać 10cm3 przygotowanej zawiesiny drozdzy i wprowadzić do kolby z podlozem, kolbe zamknąć czopem fermentacyjnym a szklana rurkewypelnic woda, kolbe z podlozem inkubować w cieplarce w 30st.

-hodowla wstrzasana w podlozuplynnym …: -‘’- bez czopa i kolbe inkubować w cieplarce w 30st

=baktrie z rodaju clostridium: - hodowla statyczna w podlozuplynnym w probowce w 37st- do probowki z jalowa woda destylowana wrzucić kilka kawalkow ziemniaka, proble zamknąć gmowym korkiem i inkubować w cieplarce w 37st.

-hodowla statyczna w podlozustaly agarowym w plytcepetriego w 37st- ezewyzarzyc w plomieniu palnika i poczekać az wystygnie, pobrać rosnoace w plytcepetriego bakterie i wykonać posiew na jalowympodlozu w plytcepetreigo, dokładnie plytke okleić plastrem i inkubować w cieplarce w 37st.

Oznaczanie miaa względnych i bezwzględnych beztlenowców na podlozu VL

-z otrzymanej proby do badan sporadzic 5 kolejnych rozcienczen, probowki z podlozem VL bezpośrednio przed posiewem zregenerować w celu usuniecia z nich tlenu poprzez ogrzewanie w cigu do 15min we wracejłazni wodnej lub aparacie kocha i ostudzić do temp 50st. Z proby nierozcieńczonej oraz poszczególnych 5 rozcienczen wprowadzić po 1cm3 do kolejnych probowek z podlozem l, probowki zamknąć gumowymi korkami i odwrocic do góry dnem w celu wymieszania zawartości, posiewy inkubować w 37 st. O obecności beztlenowców swiadca pęcherzyki gazu lub rozerwanie słupka z podloza w probowce

Wykrywanie obecności oraz oznaczenie miana betlenowcowprzetrwalnikujacych metoda buriego

-‘’-, z proby nierozcieńczonej oraz z piecu kolejnych rozcienczen wprowadzić po 1cm3 do dwóch równoległych probowek z podlozem. –‘’-, jedna serie probowek z posiewami w celu zniszczenia form wegetatywnych ogrzewac przez 10 min w lazni wodnej w temp do 85st, tak by poziom wody ogrzewającej był powyżej poziomu podloza w probowkach, proby ostudzić w wodzie wodociągowej, obie serie inkubować w 37st

Barwienie kropelek tłuszczu sudanem III

-na szkiełko przedmiotowe nanieść pipeta krople zawiesiny starej hodowli drozdzysaccharomycescerewisiae, na krople badanej hodowli nanieść krople Sudanu III, krople z materialem biologicznym i barwnikiem prykrycszkielkem przykrywkowym i odstawić na kilka min, ogladac preparat pod obiektywem 40x, na tle niezabarwionej cytoplazmy komórki tłuszczy powinny być zabarwione na kolor czerwony

Barwienie glikogenu

-‘’- na krople badanej hodowli nanieść krople plynu lugola, -‘’-, glikogen pod wplywen jodu barwi się na kolor brunatno zolty a cytoplazma na jasno zolty.

Barwieni przetrwalników bakterii z rodzaju bacillus

-na odtłuszczone szkiełko przedmiotowe nanieść pipetka krople wody, wyżarzone eza pobrać material ze skosu w próbówce dotykając 2-3 razy powierzchni skosu z bakteriami, eze wykonać rozmaz w sr cz. Szkiełka przedmiotowego, rozporwadzajac bakterie, wysuszyć preparat w tem pokojowej, a potem utrwalić w plomieniu palnika rozmazem do góry,na preparat nakropic kilka kropel roztworu fioletu krystalicznego na ok 2-3min, zlac go, preparat splukac delikatnie woda i osuszyć, nanieść krople olejku immersyjnego i ogladac w mikroskopie, wykorzystując zj. Imersji 100x