Ćwiczenie 4. Temat : Spektrofotometryczne oznaczanie rutyny w preparacie farmaceutycznym.

1. Cel ćwiczenia:

Spektrofotometryczne oznaczanie rutyny w preparacie farmaceutycznym - Rutinoscorbin oraz porównywanie wyników z deklarowaną przez producenta ilością rutyny w drażetce (25mg).

1. Aparatura i sprzęt laboratoryjny:

• Spektrofotometr

• Kuwety szklane 1cm 2szt

• Kolby miarowe poj. 10cm3 9szt

• Kolby stożkowe poj. 25cm3 3szt

• Kolby miarowe poj. 25cm3 3szt

• Lejki 3szt

• Sączki 3szt

• Zlewki poj. 150 ml 2szt

• Zlewki poj. 300 ml 1szt

• Automatyczna pipeta 1szt

• Moździerz 1szt

1. Odczynniki:

Roztwór rutyny w acetonie o stężeniu 0,2 mg/cm3

Bufor octanowy o pH= 5.0

Roztwór acetonu o stężeniu 50%

Preparat farmaceutyczny zawierający rutynę

1. Wykonanie ćwiczenia:

a) Przygotowanie krzywej wzorcowej

Aby sporządzić krzywą wzorcową potrzebny był nam roztwór rutyny o stężeniu 0,2 mg/cm3, bufor octanowy o pH = 5,0, roztwór acetonu o stężeniu 50% oraz 4 kolby miarowe o pojemności 10cm3. 3 kolby wypełniłyśmy zgodnie z tabelą nr 1, a później dopełniłyśmy kolby do kreski roztworem acetonu. Następnie w pozostałej kolbie sporządziłyśmy próbę ślepą. Przy pomocy spektrofotometru zbadałyśmy absorbancję poszczególnych roztworów wzorcowych porównując je ze ślepą próbą przy analitycznej długości fali promieniowania wynoszącej 358nm.

b) Oznaczanie rutyny w drażetkach

Zważyłyśmy 1 tabletkę Rutinoscorbinu. Następnie rozcierałyśmy je w moździerzu i odważyłyśmy dwie próbki po 0,1g z dokładnością do 1mg. Rozpuściłyśmy próbki w 10cm3 acetonu . Otrzymany roztwór przesączyłyśmy do kolby miarowej o pojemności 25cm3 i uzupełniłyśmy roztworem acetonu do kreski.

Pobrałyśmy po 1cm3 z każdego roztworu i przeniosłyśmy do dwóch kolb miarowych o pojemności 10cm3. Do kolb dodaliśmy 3cm3 buforu i uzupełniliśmy do kreski roztworem acetonu. Zmierzyliśmy absorbancję tych roztworów przy długości fali wynoszącej 358nm w porównaniu do ślepej próby.

1. Wyniki :

Nr wzorca	Objętość roztworu rutyny [cm^3]	Objętość buforu [cm^3]	Stężenie rutyny [mg/cm^3]
1	0,2	2,0	0,004
3	0,8	2,0	0,016
6	2,0	2,0	0,04

Nr wzorca	Stężenie rutyny [mg/cm3]	Absorbancja przy λ= 358nm
1	0,004	0,102
3	0,016	0,422
6	0,04	1,152

1. Opracowanie wyników:

Obliczenie funkcji f(p) = A

0,102 = 0,004a + b

1,152 = 0,04a + b

0,102 = 0,004a + b

- 1,152 = - 0,04a – b

-1,05 = - 0,036a

a = 29,16

0,102 = 0,004 * 29,16 + b

0,102 = 0,11664 + b

b = - 0,01464

y = 29,16x – 0,01464

1. Obliczanie stężenia rutyny na podstawie krzywej wzorcowej (w roztworach z próby właściwej):

• Roztwór 1:

1,038 = 29,16x – 0,01464

29,16x = 1,05264

x = 0,0361

• Roztwór 2:

1,032 = 29,16x – 0,01464

29,16x = 1,04664

x= 0,0359

1. Obliczanie ilości rutyny w jednej tabletce:

Jedna tabletka waży 219mg

Próbka 1:

0,0361 * 10 * 25 = 9,025 mg

(9,025 * 219) / 100 = 19,76 mg

Próbka 2:

0,0359 * 10 * 25 = 8,975 mg

(8,975 * 219) / 100 = 19,66 mg

1. Wnioski:

Na podstawie wykonanego ćwiczenia oraz dokonanych pomiarów, doszłyśmy do wniosku, że absorbancja zależy w dużej mierze od substancji wykorzystywanej w wytworzeniu roztworu. Z pomiarów oraz obliczeń wynika, iż im mniejsze stężenie substancji w roztworze, tym większa wartość absorbancji tego roztworu. Wartości obliczone ze wzoru, bądź odczytane z krzywej nieznacznie różnią się od bezpośredniego odczytu co może być spowodowane niedokładnością wykonania roztworów.