Ćwiczenie 2. Metody oznaczania mikroorganizmów w środowiskach naturalnych - gleba, woda, powietrze (cz.1-2)
I Oznaczanie mikroorganizmów glebowych:
1. Zważyć 5 g gleby, zawiesić sterylnie w 45 ml jałowej soli fizjologicznej (uzyskuje się w ten sposób rozcieńczenie 10-1). Wytrząsać przez 10 min., odstawić do sedymentacji na 15 min. Wykonać szereg rozcieńczeń 10-7. W tym celu z zawiesiny nad osadem glebowym pobrać sterylnie 1 ml płynu i umieścić w probówce z 9 ml jałowej soli fizjologicznej (rozcieńczenie 10-2), procedurę powtarzać do uzyskania rozcieńczenia 10-7 .
2. Wysiać metodą płytek tartych (mazanych) 0,1 ml zawiesiny z rozcieńczeń 10-4 - 10-7 na podłoża bulion-agar (w celu oznaczenia liczebności bakterii) i Czapek-Dox (w celu oznaczenia liczebności grzybów).
3. Wysiać 1 ml zawiesiny z rozcieńczeń 10-2 - 10-7 do probówek z bulionem wzbogaconym w celu oznaczenia miana bakterii.
4. Płytki i próbówki inkubować w temperaturze pokojowej przez 7 dni.
5. Po 7 dniach inkubacji policzyć wyrosłe kolonie bakterii/grzybów. Policzyć liczebność mikroorganizmów w glebie na 1 g s.m.g. (założyć wilgotność gleby 50%, przy przeliczeniu uwzględniać rozcieńczenie próbki). Podać NPL (najbardziej prawdopodobną liczbę) bakterii, wyliczoną ze wzoru: NPL=100/miano
II Oznaczanie mikroorganizmów wodnych:
1. Wykonać szereg rozcieńczeń wody z rzeki do 10-7. W tym celu pobrać sterylnie 1 ml wody rzecznej i umieścić w probówce z 9 ml jałowej soli fizjologicznej (rozcieńczenie 10-1) procedurę powtarzać do uzyskania rozcieńczenia 10-7.
2. Wysiać metodą płytek tartych (mazanych) 0,1 ml zawiesiny z rozcieńczeń 10-4 - 10-7 na podłoża bulion-agar (w celu oznaczenia liczebności bakterii).
3. Wysiać 1 ml zawiesiny z rozcieńczeń 10-1 - 10-7 do probówek z bulionem wzbogaconym w celu oznaczenia miana bakterii.
4. Płytki i próbówki inkubować w temperaturze pokojowej przez 7 dni.
5. Po 7 dniach inkubacji policzyć wyrosłe kolonie bakterii/grzybów. Policzyć liczebność mikroorganizmów w wodzie na 1 ml, przy przeliczeniu uwzględniać rozcieńczenie próbki. Odczytać miano, jako ostatnią wartość rozcieńczenia w którym zaobserwowano wzrost mikroorganizmów. Podać NPL (najbardziej prawdopodobną liczbę) bakterii, wyliczoną ze wzoru: NPL=100/miano
III Oznaczanie liczebności mikroorganizmów w powietrzu metoda sedymentacyjną:
1. Po 2 otwarte płytki Petriego z podłożem bulion-agar i Czapek-Dox pozostawić na 15 min. w dwóch różnych lokalizacjach. Po upływie czasu ekspozycji płytki zamknąć i inkubować w temperaturze pokojowej przez 7 dni.
2. Po 7 dniach inkubacji policzyć wyrosłe kolonie bakterii i grzybów. Podać liczbę mikroorganizmów na 1m3 powietrza, obliczoną wg wzoru:
X=(a x 5 x 104)/πr2 x t
Gdzie:
a - średnia liczba kolonii na powierzchni podłoży
πr2 - powierzchnia płytki Petriego [cm2]
t - czas ekspozycji [min]
X - liczba mikroorganizmów na 1m3 powietrza