img005 (3)

X

110

Metoda płytkowa Kocha doczekała mo licznych udoskonaleń i modyfikacji oraz automatyzacji. Jednakże w wersji oryginalnej jest zawsze traktowana jako metoda odwoławcza. Zmodyfikowane metody instrumentalne zostana omówione w jednym z kolejnych rozdziałów.

OKREŚLENIE NAJBARDZIEJ PRAWDOPODOBNEJ •

LICZBY DROBNOUSTROJÓW NPL

Metoda ta służy do oznaczania drobnoustrojów występujących w niewielkiej liczbie w produkcie spożywczym. Polega ona na hodowli określonych grup bakterii na pozywkacn selektywnych (płynnych lub stałych). Tego rodzaju podłoża sprzyjają namnożeniu bakterii występujących w niewielkiej liczbie. W metodzie lej posiewa Rie równolegle 3 lub 5 probówek (lub płytek) zawierających odpowiednio po 10 cm³ lub 15 cm’ podłoża, ustawionych w 3 rzędach, zn leżnie od kierunku analizy i rodząju produktu. Do pierwszego rzędu probówek (płytek) posiewa sic po 10 cm³ (rzadziej po i cm³) próbki z rozcieńczenia wyjściowego (1:10), a następnie po I cm"' z dwóch kolejnych rozcieńczeń dziesiętnych. Jeśli posiewamy po 10 cm³ próby, w pierwszym rzędzie pożywka winna być podwójnie stężona. Po inkubacji z odpowiednich tabel opartych na rachunku prawodpodobienstwa (sir. 131) odczytuje sic najbardziej prawdopodobna liczbę bakterii.

Zadanie ćwiczeniowe 1

Oznaczanie ogólną) liczby bakterii w mleku pasteryzowanym płytkową metodą

Kocha

■    Z otrzymanego mleka sporządzić rozcieńczenia od I0'¹ do I0‘⁴, używając roztworu fizjologicznego soli.

■    Z każdego rozcieńczenia wykonać posiew, przenosząc po 1 cm¹ do Irzęch równoległych płytek Petriegn i zalać 15 ml ngnru odżywczego z mlekiem.

■    Płytki umieścić w termostacie o temperaturze 3()ⁿC na 72 godziny, po czym obliczyć liczbę bakterii w I cm ' badanego mleka.

Zadanie ćwiczeniowe 2

Oznaczanie pałeczek z rodzaju Prouut metodą poeiewu powierzchniowego

■    Z otrzymanej próbki żywności sporządzić rozcieńczenia 10"*, I0"^J, 10'³

■    Do 9 płytek Pełnego rozlać po około 15 cm³ podłoża wybiórczego Nogrudy i pozostawić do zakrzepnięcia.

■    Z każdego rozcieńczenia dokonać posiewu na trzy równoległe płytki z pożywka, rozprowadzając na powierzchni po 0,5 cm^J zawiesiny jałowa bagietka, tzw. g łasiczka.

■    Posiewy inkubuje sie w 37°C przez 24 godziny i oblicza liczbę pałeczek z grupy Proteus. Baktene Protem, o silnych właściwościach proteolitycznych, rosną w postaci błękitnych kolonii, a podłoże przybiera barwę zielona.

Zadanie ćwiczeniowe 3

Oznaczanie ogólna] Herby drobnoustrojów w powietrza metodą sedymentacyjną

■    Przygotowuje się płytki Petriego zawierniace zestalony bulion oraz brzeczkę

■    W pomieszczeniu, w którym oznacza się stopień zakazania powietrza, płytki otwiera aie • eksponuje 5, 10 lub 15 minut w zależności od spodziewanego zakażenia.

■    Po upływie określonego czasu płytki zamyka sic ■ wstawia do termostatu o temperaturze 30PC na 48 godzin.

■    Posługując się podanym niżej wzorem Omiełiońskicgo oblicza sie liczbę bakterii i grzybów w 10 dm³ powietrza.

gdzie:

X - liczba drobnoustrojów w 10 dm³ powietrza, o - średnia liczba kolonii z dwóch płytek z danego podłoża, b - powierzchnia płytki w centymetrach kwadratowych (dla płytki o średnicy 10 cm powierzchnia wynosi 78,5 cm²),

k - współczynnik czasu ekspozycji płytki (dla 5 mm kwi, dla 10 min k » 2 itd.),

100 - przelicznik powierzchni płytki na 100 cm²

METODY WSKAŹNIKOWE

Metody wskaźnikowe pozwalają na stwierdzenie obecności drobnoustrojów na podstawie ich aktywności biochemicznej.

Metodami tymi określa sie obecność drobnoustrojów, które nawet w niewielkich ilościach wskazują na stan samumy produktu, jednocześnie sa trudne do wykrycia metodami płytkowymi.

Do metod wskaźnikowych zalicza sie:

-    oznaczanie miana,

-    próbę reduktazowa.