img005 (3)

110

110

....

Metoda ptyłkowa Kocha doczekała sio licznych udoskonaleń i modyfikacji oraz automatyzacji. Jednakże w wersji oryginalnej jest zawsze traktowana jako metoda odwoławcza. Zmodyfikowane metody instrumentalne zostana omówione w jednym z kolejnych rozdziałów.

OKREŚLENIE NAJBARDZIEJ PRAWDOPODOBNEJ •

LICZBY DROBNOUSTROJÓW NPL

Metoda ta stuzy do oznaczania drobnoustrojów występujących w niewielkiej liczbie w produkcie spożywczym. Polega ona na hodowli określonych grup bakterii na pożywkach selektywnych (płynnych tub stałych). Tego rodzaju podłoża sprzyjają namnożeniu bakterii występujących w niewielkiej liczbie. W metodzie tej posiewa sie równolegle 3 lub 5 probówek (lub płytek) zawierających odpowiednio po 10 cm³ lub 13 cm' podłoża, ustawionych w 3 rzędach, zalezme od kierunku analizy i rodztyu produktu. Do pierwszego rzędu probówek (płytek) posiewa się po 10 cm³ (rzadziej po i cm³) próbki z rozcieńczenia wyjściowego (1:10), a następnie po l cm³ z dwóch kolejnych rozcieńczeń dziesiętnych. Jeśli posiewamy po 10 cm³ próby, w pierwszym rzędzie pożywka winnu być podwójnie slęzonn. Po inkubacji z odpowiednich tabel opartych na rachunku prawodpodobieństwa (sir. 131) odczytuje sic najbardziej prawdopodobna liczbę bakterii.

Zadanie ćwiczeniowe 1

Oznaczanie ogólną) liczby bakterii w mleku pasteryzowanym płytkową metodą

Kocha

■    Z otrzymanego mleka sporządzić rozcieńczenia od I0"¹ do I0'⁴. używając roztworu fizjologicznego soli.

■    7. każdego rozcieńczenia wykonać posiew, przenosząc po l cm' do trzech równoległych płytek Petnego i zalać 15 ml ngnru odżywczego z mlekiem.

■    Płytki umieścić w termostacie o temperaturze 30°C na 72 godziny, po czym obliczyć liczbę bakterii w 1 cm³ badanego mleka.

Zadanie ćwiczeniowe 2

Oznaczanie pałeczek z rodzaju Prouut metodą posiewu powierzchniowego

■    Z otrzymanej próbki żywności sporządzić rozcieńczenia 10'*, I0'², 10'³

■    Do 9 płytek Pełnego rozlać po około 13 cm³ podłoża wybiórczego Nogrady i pozostawić do zakrzepnięcia.

■    Z każdego rozcieńczenia dokonać posiewu na trzy równoległe płytki z pożywka, rozprowacayac na powierzchni po 0,5 cm^-' zawiesiny jałowa bagietką, tzw. glaszczka.

■    Posiewy inkuhuje sie w 37°C przez 24 godziny i oblicza liczbę pałeczek z grupy Proteus. Bakterie Proteus, o silnych właściwościach proteolitycznych, rosną w postaci błękitnych kolon ii, a podłoże przybiera barwę zieloną.

Zadanie ćwiczeniowe 3

Oznaczanie ogólną] Herby drobnoustrojów w powietrza metodą sedymentacyjną

■    Przygotowuje sic płytki Pełnego zawierniące zestalony bulion oraz brzęczkę

■    W pomieszczeniu, w którym oznacza się stopień zakażenia powietrza, płytki otwiera sie • eksponuje 5, 10 lub 15 minut w zależności od spodziewanego zakozema.

B Po upływie określonego czasu płytki zamyka sic • wstawia do termostatu o temperaturze 30°C na 48 godzin.

B Posługując się podanym niżej wzorem Omielinńskicgo oblicza sie liczbę bakterii i grzybów w 10 dm³ powietrza.

a 100

tłk

gdzie:

x - liczba drobnoustrojów w 10 dm³ powietrza, a - średnia liczba kolonii z dwóch płytek z danego podłoża, b - powierzchnia płytki w centymetrach kwadratowych (dla płytki o średnicy 10 cm powierzchnia wynosi 78,5 cm²),

k - współczynnik czasu ekspozycji płytki (dla 5 mm k-ł, dla 10 min k- 2 M),

100 - przelicznik powierzchni płytki na 100 cm²

METODY WSKAŹNIKOWE

Metody wskaźnikowe pozwalają na stwierdzenie obecności drobnoustrojów na podstawie ich aktywności biochemicznej.

Metodami tymi określa sie obecność drobnoustrojów, które nawet w niewielkich ilościach wskazują na stan sanitarny produktu, jednocześnie sa trudne do wykrycia metodami płytkowymi.

Do metod wskaźnikowych zalicza sie:

-    oznaczanie miana,

-    próbę reduktazowa.