Inżynieria 1id 454

4

/I

4

CiBtEAJB

I Pod w /|lędcm biochemicznym enzymy restrykcyjne 10 atczgtwnikk:.MY

Cjrybonuklcł/y d) lipwy

’ Do grupy I zaliczamy enzymy restrykcyjne, których aktywność »•^{, ,,n>} oó Al I*. S-łdcnozylomctioniny i Mg'

S) tylko ATP i Mg³’

c)    tylko Mg³*

d)    tylko ATP i S-adenozyło metioniny

3    Enzymy restrykcyjne II klasy

a)    zawsze generują tzw rudmicrnosci typu 5’

b)    rozpoznające sekwencje s/ostkowc zazwyczaj trawią DNA na mniejsze fragmenty niz enzymy czwórkowe (ej) ich miejsce trawienia może leżeć naprzeciwko siebie w obu niciach i wówczas powstają końce tępe

o) zawsze generują nadnucrnosci długości 3 nuklcotydów

4    Enzymy restrykcyjne II klasy

W* "“Jł rozdzielony aktywność resrryktazy i mcłylazy

m jeśli rozpoznaj sekwencje bogate w pary AT lub GC mogą być na ogól uważane za rzadkotn.ycc c^substrafem może być wyłącznic dsDNA

<§

mogą rozpoznawać wieloznaczne sekwencje palindromowe

A

Z

2

5 Które sposrod poniższych sekwencji me są najprawdopodobniej miejscami rozpoznania enzymów restrykcyjny eh kl

a)    GAATTC

b)    ATCCTA (ej GCTTGC d) CTGCAG

6 Aktywność gwiaździsta enzymu restrykcyjnego

# pojawia się jako elekt zbyt długiej inkubacji mieszaniny reakcy jnej pojawia się przy nadmiarze enzy mu restrykcyjnego c) pojawia się u bardzo nielicznych cnzymósv

d) zalczy od rodzaju użytego DNA i pojawia się tylko podczas trawienia genomowego DNA

7 Przyłączanie starterów a) przeprowadza się w temp pokojowej

wj) jest kluczowym etapem reakcji PCR wpływającym na jej specyficzność (cT) przeprowadza się w zakresie temp 37-72°C

o) na ten etap można wpływać stosując dodatki takie jak DMSO lub formamid

8. Nowo syntetyzowane nici produktów pierwszorzędowych reakcji PCR (uy nic mają określonej długości /    5) mają ściśle określoną długość

A J P°*°^{wa n,c 0,8} określonej długości ^V-^/ 0) nic zawierają nucjsca przyłączania starterów

2? W reakcji PCR

(aj) pierwsze właściwe zamierzone fragmenty dsDNA powstają w 3 cyklu reakcji U) krótkie dsDNA są amplifikowane w kolejnych cyklach w sposób liniowy c) produkty dnigorzędowc tworzone są sv sposób wykładniczy fdj długość amplifikowanych fragmentów jest zdefiniowana przez kośtcc 5 start aa

10. Etap dcnaturacji

QJ przeprowadza się w temp 94-96°C przez 20-30 sok. y b) jego czas mc jest zależny od rodzaju użytej matrycy / (ej nic może być ostatnim etapem reakcji PCR

o) temperatura dcnaturacji powinna być wyzsza w ostatnich cyklach PCR

Ą

11 Stężenie wolnych jonów Mg*’ w mieszaninie reakcyjnej PCR zależy: a tylko od dŃTP i EDTA b tylko od PPii EDTA c fylko od EDTA @ od d NTP PPii EDTA