DSC00275(1)

Wykonanie:

1. Wykonaj próbę odczynnikową - do kuwety dodaj kolejno:

1200 pL buforu fosforanowego o pH 7,0, zawierającego 5 mM EDTA 50 pL wody dest.

100 pL roztworu GSH 100 pL roztworu NADPH 5 pL roztworu GR

Po wymieszaniu próbę inkubuj przez 5 min. w temp. pokojowej. Następnie dodaj 50 pL roztworu t-BOOH, znowu wymieszaj i mierz zmiany absorbancji co minutę przez 5 min. przy długości fali X = 340 nm. Pomiary wykonuj względem buforu fosforanowego (próba ślepa).

2. Wykonaj próbę badaną - do kuwety dodaj kolejno:

1200 pi. buforu fosforanowego o pH 7,0, zawierającego 5 mM EDTA 50 pL osocza 100 pL roztworu GSH 100 pL roztworu NADPH 5 pL roztworu GR

Po wymieszaniu próbę inkubuj przez 5 min. w temp. pokojowej. Następnie dodaj 50 pL roztworu t-BOOH, znowu wymieszaj i mierz zmiany absorbancji co minutę przez 5 min. przy długości fali X = 340 nm. Pomiary wykonuj względem buforu fosforanowego (próba ślepa).

3. Oblicz aktywność peroksydazy glutationowej w osoczu, korzystając z poniższego wzoru:

GSH-Px [U/L] = (A A - A A_odci) 3 4839

A A - średnia zmiana absorbancji próby badanej na minutę

A Aodcz - średnia zmiana absorbancji próby odczynnikowej na minutę

4839 - współczynnik kalibracji, uwzględniający objętość mieszaniny inkubacyjnej,

współczynnik absorbancji i przeliczenie jednostek na wymagane w międzynarodowi

enzymatycznej