img161

Redukcja azotanów. Zdolność redukcyjna azotanów jest jedną z ważniejszych cech identyfikacji drobnoustrojów, badaną na podstawie wykrywania azotynów. Badaną kulturę bakteryjną posiewa się na pożywkę z dodatkiem 1% azotanu potasu. Po zaszczepieniu i inkubacji w optymalnej temperaturze należy sprawdzić obecność azotynów w pożywce. Powstają one w wyniku redukcji azotanów przez badane drobnoustroje i w środowisku kwaśnym w obecności odczynnika Griessa (kwasu sulfanilowego, alfa--naftyloaminy) dają czerwone zabarwienie. Brak tej barwy świadczy o reakcji negatywnej, która może być wywołana brakiem redukcji lub zużyciem wytworzonych azotynów. Jeżeli w pożywce pozostały azotany niezreduko-wane, dodatek sproszkowanego cynku przeprowadzi je w postać azotynów, co objawi się barwą czerwoną. Wynik negatywny będzie oznaczać zużytkowanie azotynów przez bakterie.

10.3.5. Inne reakcje

Wytwarzanie katalazy

Zdolność tworzenia katalazy wykazuje większość organizmów tlenowych i względnie beztlenowych. Enzym ten jest niezbędny do rozkładania nadtlenków powstających w procesach oddychania. Bakterie ściśle beztlenowe nie tworzą katalazy. Badanie przeprowadzić na szkiełku przedmiotowym: do dużej kropli wody utlenionej wprowadzić ezą z oczkiem badaną kulturę ze skosu i dokładnie wymieszać. W obecności katalazy tworzą się widoczne gołym okiem pęcherzyki gazu - 0₂. Przykładami katalazo-dodatnich bakterii są: Micrococcus, Staphylococcus, Escherichia, Pseudomonas, Bacillus.

Wytwarzanie koagulazy

Gronkowce chorobotwórcze (Staphylococcus aureus) tworzą koagulazę ścinającą osocze krwi ludzkiej i króliczej - w odróżnieniu od gronkowców saprofitycznych Staph. epidermidis nie wykazujących tej właściwości.

Wytwarzanie oksydazy cytochromowej

Oksydaza cytochromowa stanowi charakterystyczny układ enzymatyczny drobnoustrojów typowo tlenowych. Wytwarzanie jej jest cechą identyfikacyjną w różnicowaniu Gram-ujemnych pałeczek. Na płytce lub szkiełku przedmiotowym umieszcza się kawałek bibuły filtracyjnej i zwilża ją kilkoma kroplami świeżo przygotowanego odczynnika (1% roztworu tetrametyło--p-fenylo-dwuaminy). Z 24-godzinnej kultury bulionowej badanych komórek pobiera się oczkiem ezy nieco materiału i wykonuje rysę na bibule. W obecności oksydazy cytochromowej rysa natychmiast przyjmuje zabarwienie fiołkowopurpurowe. Pojawienie się słabego zabarwienia po czasie dłuższym aniżeli 1 min uważa się za wynik negatywny.

85