img166

Rys. 11.1. Sporządzanie barwionego preparatu do liczenia drobnoustrojów metodą Breeda: a - w środku szkiełka kwadrat o powierzchni 1 cm², b - rozmaz określonej objętości badanej próby

wowym. Preparat wysuszyć, utrwalić w płomieniu palnika i zabarwić, następnie policzyć komórki w 20 polach widzenia pod immersją i obliczyć średnią liczbę w jednym polu widzenia. Obliczyć powierzchnię pola widzenia z użyciem obiektywu immersyjnego (rozdz. 2) i podać wynik, przeliczając liczbę komórek na 1 cm³ badanej zawiesiny wg wzoru: a ■ b

n =

T'

gdzie:

n - liczba komórek w 1 cm³, a - średnia liczba komórek w 1 polu widzenia,

b - liczba pól widzenia w rozmazie (stosunek powierzchni rozmazu do powierzchni pola widzenia),

V - objętość badanego materiału (cm³).

Metoda bezpośredniego liczenia komórek w komorach. Używane są komory Thoma, tzw. hemocytometry (rys. 11.2), Howarda, Burkera i inne. Różnią się one wymiarami powierzchni, na których liczy się drobnoustroje. Komora Thoma pozwala na obserwację dużych komórek, np. drożdży. Jest ona grubym szkiełkiem podstawowym, na którym są wgłębienia - jedno lub dwa, które są właściwymi komorami podzielonymi na 400 kwadratów. Objętość komory (nad pojedynczym kwadratem) wynosi 1/4000 mm³ (1/20 x 1/20 x 1/10). Co piąty kwadrat w obu kierunkach jest podzielony linią na dwie jednakowe części, w wyniku czego część kwadratów ma powierzchnię o połowę mniejszą, a cała komora jest podzielona w ten sposób na 16 dużych kwadratów składających się z 16 małych kwadracików. W celu określenia liczby drobnoustrojów należy oczkiem ezy lub mikropipe-tą wprowadzić do komory Thoma badaną zawiesinę. Policzyć liczbę komó-

90