Obrazek 09

94

Liczba mikroorganizmów (x jtk) w 1 cm³ obliczyć wg wzoru:

x JKT/ cm³ = a x 4 x 10* x R

gdzie:

a = średnia liczba komórek w 1 kwadraciku 4 x 10³ = przeliczenie objętości 1 kwadracika na 1 cm³ R = rozcieńczenie wyjściowego materiału

Zasada metody polega na liczeniu liczby komórek w losowo wybranych 20 kwadratach. Z uwagi na grubość komory i głębokość kwadratów komora pozwala na liczenie większych od bakterii mikroorganizmów, takich jak np„ drożdże czy zarodniki lub strzępki grzybów. Do obliczeń stosować można także inny rodzaj komory - tzw. komorę BGrkera w której obliczanie ilości komórek wykonujemy podobnie jak w komorze Thoma. Do obliczeń ilości strzępek pleśni w takich produktach jak przed er pomidorowy stosuje się komorę Howarda.

Materiały:

1.    Probówka z 24 h hodowlą drożdży (Candida lipolitica, Candida ulilis)

2.    Probówka z jałowym podłożem dla drożdży    --

3.    Komora Thoma + szkiełko nakrywkowe

4.    Eza z oczkiem

5.    Biękit metylenowy z płynem rozjaśniającym

6.    Mikroskop

(Wykonanie:

I

Przytwierdzić szkiełko nakrywkowe do szkiełka z komorą Thoma

Ustawić siatkę komory Thoma na biegu promieni świetlnych mikroskopu, znaleźć

siatkę przy powiększeniu obiektywu = 10x, przejść na powiększenie 40x. Nie

zmieniać ustawienia mikroskopu. Zapamiętać położenie komory na stoliku

mikroskopu    i

Dodać 1 kroplę barwnika z ptynem rozjaśniającym do hodowli

Pobrać 1 oczko hodowli drożdży. Przytknąć do styku szkiełka nakrywkowego'

z komorą

Ustawić ostrość obrazu. W przypadku dużych liczebności, przygotować;

rozcieńczenie 10-tne wyjściowej hodowii przenosząc 1ml hodowli do 9 ml podłoża wi

probówce. Powtórzyć czynności wymienione w punkcie "1,214

Policzyć liczbę komórek w 20 - 40 losowo wybranych kwadracikach Ponieważ

rozmieszczenie komórek w preparacie jest zwykle nierównomierne, dla zmniejszenia ■

błędu obliczeń, liczbę średnią określać w oparciu o większą ilość losowo wybranych _i

kwadratów

Wyniki z poszczególnych kwadracików zanotować w tabeli 33

i Tabela 30

Określanie liczebności komórek w komorze Thoma

Nr kwadracika	Liczba komórek		Nr kwadracika	Licz ba komórek
1			21
2			22
3			23
4			24
5			25
6			26
7			27
8			28
9			29
10			30
11			31
12			32
13			33
14			34
15			35
16			36
17			37
18			38
19			39
20			40
Średnia arytmetyczna z............pól

Wnioski:

;

j

:

Dala

zaliczenie

i

i |

i