(5)

wskazać hetero- i homozygoty pod względem badanego genu określić (o ile lo możliwe) położenie diaforaz w żelu barwionym srebrem i oszacować ich ilość w porównaniu z innymi białkami.

Matriały:

Próbki roślinne, najlepiej z osobników zc spokrewnionych gatunków lub z różnych populacji tego samego gatunku.

Liśoe szpinaku (Spinacia oleracea), Pnmula sp._t Trilicum sp. lub innej rośliny hodowlanej.

Wstępnie oczyszczony preparat reduktazy ferredoksyna:NADP⁺ ze szpinaku.

Spolimeryzowane żele do elektroforezy

Odczynmki:

Roztwory do barwienia srebrem - wg. przepisów podanych niżej lub do barwienia met. Coomasie

Odczynmki do elektroforezy:

Bufor do zawieszania próbki (5 x stężony):

Iris	312.5	mM
glicerol lub sacharoza	50	%
błękit bromofenolowy	o.os	%
Roztwory do elektroforezy:
Roztwór A
Akrylaroid	30	%
Bis-akrylamid	0.8	%
Roztwór B (bufor do żelu rozdzielającego)
Tns	18.2	8

rozpuścić w 40 ml wody doprowadzić do pH 8.8 przy pomocy HG i dopełnić do 100 ml

Roztwór C (bufor do żelu zagęszczającego)

i ris    6.0 g

rozpuścić w 40 inl wody doprowadzić do pH 6.8 przy pomocy 1TC1 i dopełnić do 100 mi

Roztwór nadsiarczanu amonu

0.5 g nadsiarczanu amonu rozpuścić w 5 ml wody

Bufor elektrodowy

Tris	3	8
Glicyna	14.4	8
woda do	1000	ml

pH powinno wynosić ok. 8 8. Jeżeli byłoby inne, zmienić ilość glicyny.

Przygotowanie żelu uszczelniającego i rozdzielającego (10% wzgl akrylamidu)

Zmieszać    wody    8 3 ml

roztworu A    6.7 ml

roztworu B    5,0 ml

Z przygotowanego roztworu pobrać 3 ml, dodać: r-ni nadsiarczanu 100 pił TEMED-u    10 gl