0001

2010-11-01

Kondycjonowanie pożywki

•    Stosuje się gdy wzrost i podziały komórek nie są zadowalające

•    Polega na dodaniu pożywki, w której przez kilka dni rosły już komórki innego gatunku

•    Substancje odżywcze w tej pożywce nie uległy wyczerpaniu

•    Została ona wzbogacona o wydzielone do niej metabolity

Zmiany degeneracyjne i zakażenia

•    Zmiana barwy z jasnej na brązową

•    Zmętnienie

•    Pojawienie się „kłaczków”

•    Zawiesiny zakażone należy usunąć

•    Można zmienić skład pożywki, warunki fizyczne, tempo wytrząsania, gęstość inokulatu

Krzywa wzrostu zawiesiny komórek

'L

a)

b)

c)

d)

e)

Faza spoczynkowa Faza wykładnicza Faza wzrostu liniowego Faza obniżonego wzrostu Faza stacjonarna

Żywotność komórek

• Ustala się za pomocą barwników cytoplazmy - TTC

TTC (czterochlorek 2.3.5-trifenvIotetrazoliowv) - jest wskaźnikiem redox stosowanym do odróżniania tkanek aktywnych i nieaktywnych metabolicznie. Biały związek jest enzymatycznie redukowany do TPF (1,3,5-trifenyloformazanu) w komórkach ze względu na aktywność różnych dehydrogenaz. TTC pozostaje biały w miejscach komórek, gdzie enzymy zostały zdenaturowane lub uległy zniszczeniu.

Żywotność komórek

• Błękit Evansa (błękit trvpanowvi

Barwi cytoplazmę martwych komórek. W komórkach żywych błękit Evansa nie przechodzi przez membranę, jednak łatwo dostaje się do wnętrza komórek martwych wybarwiając ich cytoplazmę na niebiesko.

Skład pożywki zastosowanej do hodowli zawiesiny komórkowej tytoniu

Odczynnik	g/L
sole Murashige & Skoog	4,3g
witaminy Murashige & Skoog (1000x stężone) w fotmic roztworu (lmg/ml)	100 ftl
sacharoza	lOOmg
myo-inozytoi	370mg
kh2po4	370mg
2,4-D (kwas 2,4-dichlorofcnoksyoctowy) w formie roztworu (lmg/ml)	200 fil

3