002

2010-11-01

Kultury zawiesin komórek

Katarzyna Tracz

Zakład Anatomii i Cytologii Roślin

Inicjacja kultur zawiesinowych

•    Kałus - jest luźny i podatny na rozbicie, krótki czas oczekiwania na zawiesinę

•    Drobno pocięte zarodki łub blaszki liściowe -

dłuższy czas oczekiwania na zawiesinę niż w przypadku kalusa

Każdy etap wymaga dużej staranności - komórki w zawiesinie są bardzo podatne nawet na niewielkie zmiany warunków oraz na zakażenia bakteryjne i grzybowe.

Morfologia kalusa tytoniu

0.1 mg/1 ldnetyny    2.0 mg/1 IAA

3.0 mg/12,4-D    3.0 mg/I 2-iP

2,4-D - kwas 2,4-dichlorofenoksyoctowy 2-iP - 6-(Y,y-diinetyk>dliloamino)-puryna

Ustabilizowana zawiesina komórek

•    populacja pojedynczych komórek lub niewielkich agregatów komórkowych

•    intensywnie rosnąca w rytmicznie wytrząsanej pożywce płynnej

•    charakteryzująca się powtarzalnymi parametrami wzrostu

Założenie kultury

•    Ważna jest ilość tkanki kalusowej w stosunku do objętości pożywki - decyduje o powodzeniu

•    Wielkość inokulum - część materiału służąca do założenia kultury - zwykle 2-5 g ś.m. / 30 ml pożywki

•    Objętość pożywki nie powinna przekraczać 0.2-0.25 pojemności kolby stożkowej - zapobiega to nagromadzeniu się C0₂ i etylenu, które hamują wzrost

•    Dobór pożywki zależy m.in. od gatunku rośliny i celu doświadczenia

1