3

Cel ćwiczenia

Celem ćwiczenia było poznanie dwóch podstawowych kierunków biokonwersji materiałów celulozowych:

S biosyntezy enzymów celulolitycznych i białka mikrobiologicznego ( SCP i MBP)

S enzymatycznej hydrolizy odpadów celulozowych.

Wykonanie ćwiczenia

1. Hodowla pleśni Aspergillus Niger na podłożach zawierających:

•S pył bawełniany ( statyczne warunki hodowli, czas hodowli 10 dni)

^ celulozę mikrokrystaliczną ( hodowla wgłębna, czas hodowli 5 dni)

( nie wykonywane na zajęciach, przygotowane wcześniej)

Podłoże hodowlane wzbogacono w kiełki słodowe (źródło azotu), ekstrakt z otrąb pszennych oraz sole mineralne. Po sterylizacji, podłoża zaszczepiono zawiesiną zarodników pleśni A. Niger. Po skończonej hodowli oddzielono części stałe podłoża od filtratu, stanowiącego roztwór enzymów celulolitycznych.

2. Oznaczenie w filtratach z podłoża hodowlanego aktywności endo-1.4-B-gIukanazy

1) Oznaczenie ilości cukrów redukujących obecnych w płynie pohodowlanym metodą Somogyi-Nelsona

C= 0,3234-E-R

C-ilość cukrów redukujących [ pM/ml]

E- absorbancja odczytana na kolorymetrze ( Specol 520 nm)

R- rozcieńczenie płynu pohodowlanego R=25

0,3234- przelicznik wynikający z krzywej wykonanej dla glukozy

Zmierzona absorbancja E=0,23

C= 0,3234-E-R [ pM/ml]

C= 0,3234-0,23-25 [ pM/ml] C=l,86 [pM/ml]