Obraz (17

II. Wykrywanie leków o działaniu antydepresyjnym w moczu

1. Test orientacyjny na obecność imipraminy w moczu

Przed przystąpieniem do ekstrakcji należy wykonać test orientacyjny na obecność imipraminy w moczu. W tym celu do ok. 0,5 cm¹ moczu dodać ok. 1 cm¹ odczynnika do identyfikacji imipraminy². Na obecność imipraminy wskazuje wystąpienie niebieskiego zabarwienia, które następnie przechodzi w zielone,________________

Wyodrębnianie leków z materiału biologicznego (moczu)

Ekstrakcję leków z moczu przeprowadza się ze środowiska alkalicznego. W tym celu 10 cm¹ moczu należy doprowadzić do pH=10 za pomocą Na₂C03, a następnie wytrząsać przez 5 min z 10 cm¹ chloroformu.

Ekstrakt odparować do sucha na łaźni wodnej, a suchą pozostałość na szkiełku zegarkowym rozpuścić w 0,3 cm¹ etanolu.

2. Wykonanie chromatografii cienkowarstwowej (TLC).

Na płytkę chromatograficzną³ nanieść kapilarą¹ roztwory wzorcowe⁴ amitryptyliny (4 dotknięcia), imipraminy (2 dotknięcia) i sineąuanu (4 dotknięcia) oraz badany ekstrakt (5 dotknięć). Chromatogram rozwinąć do wysokości ok. 15 cm w układzie toluen/dioksan/amoniak⁵. Po rozwinięciu i wysuszeniu chromatogram spryskać odczynnikiem Mandelina⁶. Uzyskane barwne plamy i ich R_f porównać z danymi otrzymanymi dla roztworów wzorcowych.

3. Analiza spektrofotometryczna w zakresie ultrafioletu (widmo w UV)

Suchą pozostałość na szkiełku zegarkowym rozpuścić w 1 cm¹ etanolu i 0,1 cm¹ otrzymanego roztworu rozcieńczyć 100-200-krotnie 0,2 N kwasem siarkowym. Widmo badanego roztworu należy zdejmować na spektrofotometrze Cary 1 w zakresie 220-320 nm wobec 0,2 N kwasu siarkowego jako odnośnika. Na podstawie uzyskanego widna dokonać identyfikacji leku porównując wyniku własne z widmami substancji wzorcowych.

5

1

² Roztwory wzorców i badanych próbek nanosi się kapilarą ok. 1,5 cm od dolnego brzegu płytki i po ok. 2 cm od brzegów bocznych.

2

' Odczynnik do identyfikacji imipraminy przygotować przez zmieszanie równych objętości roztworów: 0,2% dwuchromianu potasowego, 30% kwasu siarkowego, 50% kwasu azotowego, 20% kwasu nadchlorowego.

3

Rozwijanie przeprowadza się na płytkach chromatograficznych o rozmiarach 20 x 20 cm powleczonych żelem krzemionkowym Kieselgel 60, firmy Merck.

4

   Roztwory wzorcowe: 0,2% roztwory akloholowe amitryptyliny, imipraminy i sinequanu.

5

   Układ rozwijający: toluen/dioksan/amoniak 25% w stosunku 60 : 35 : 5.

6

   Odczynnik wybarwiający - Odczynnik Mandelina: 0,l g wanadynianu amonowego rozpuścić na zimno w 20 cm¹ 96% kwasu siarkowego.