Obraz (55

3. Wykonanie kalibracji

Kalibrowanie powinno być wykonane pięciokrotnie, przy użyciu każdorazowo moczu innej osoby nieeksponowanej (po zmierzeniu gęstości moczu). Do kolejnych probówek należy odmierzyć roztwory w następujących ilościach:

Roztwory	Nr probówki
	I	II	III	IV	V	VI	VII	VIII
^1 Mocz [cnT]	10	10	To	10	10	10	10	10
Roztwór wzorcowy p-aminofenolu	0	0.1	0.2	0.3	0.5	0.7	1	1,5
[cm']__ _
Stężony HC1 [cm’]	5	5	5	5	5	5	5	5
W tak przygotowanych próbach otrzymano:
Zawartość /7-aminofenolu [gg] w próbie wstawionej do hydrolizy:	0	100	200 2	300	500	700	1000	1500
Zawartość /7-aminofenolu [gg] w 1 cnT hydrolizatu (otrzymanego po uzupełnieniu próby po hydrolizie do 100 cm^J)	0	I		J	5	7	10	15

Tak przygotowane wzorce poddać hydrolizie (ogrzewać w łaźni wodnej przez 1,5 godziny). Dalsze postępowanie (odmierzenie odpowiedniej ilości próby i uzupełnienie wodą do 100 cm oraz wykonanie reakcji indofenolowej) - patrz punkt 2.

Z uzyskanych wyników kalibracji sporządzić wykres zależności wartości absorbancji (A) od zawartości /7-aminofenolu [gg] w 1 cm' hydrolizatu (C) lub obliczyć na podstawie wyliczonego współczynnika kalibracji (k).

4. Obliczanie wyników

Zawartość /^-aminofenolu w badanej próbie (hydrolizacie) odczytać z wykresu kalibracyjnego, a następnie obliczyć stężenia /^-aminofenolu w badanym moczu. Należy uwzględnić, że 1 cm' rozcieńczonego hydrolizatu pobranego z kolby odpowiada 0,1 cm' pierwotnego moczu (z próby 10 cm’ moczu pochodzącego od robotnika uzyskano 100 cm' ostatecznego hydrolizatu).

Stężenie /7-aminofenolu w badanym moczu wynosi więc:

10C

X =    _ [|-ig/cm³]

W

gdzie: X - stężenie /7-aminofenolu w badanym moczu lug/cm³|

C - ilość /?-aminofenolu w końcowej barwnej próbie [gg]

W - objętość hydrolizatu pobranego do oznaczenia [cm ']

Znając objętość badanej dwugodzinnej próby moczu, należy obliczyć szybkość wydalania /7-aminofenolu [mg/h] wg następującego wzoru:

a ‘ b

V -    - [mg/h]

2 godz.

gdzie: V - szybkość wydalania /7-aminofenolu z moczem [mg/h] a - stężenie /7-aminofenolu w badanym moczu |mg/dm³|

b - objętość moczu zebranego w ciągu dwóch ostatnich godzin pracy [dnT] (np. 0.2 dnT)

3