3. Wykonanie kalibracji
Kalibrowanie powinno być wykonane pięciokrotnie, przy użyciu każdorazowo moczu innej osoby nieeksponowanej (po zmierzeniu gęstości moczu). Do kolejnych probówek należy odmierzyć roztwory w następujących ilościach:
Roztwory |
Nr probówki | |||||||
I |
II |
III |
IV |
V |
VI |
VII |
VIII | |
1 Mocz [cnT] |
10 |
10 |
To |
10 |
10 |
10 |
10 |
10 |
Roztwór wzorcowy p-aminofenolu |
0 |
0.1 |
0.2 |
0.3 |
0.5 |
0.7 |
1 |
1,5 |
[cm']__ _ | ||||||||
Stężony HC1 [cm’] |
5 |
5 |
5 |
5 |
5 |
5 |
5 |
5 |
W tak przygotowanych próbach otrzymano: | ||||||||
Zawartość /7-aminofenolu [gg] w próbie wstawionej do hydrolizy: |
0 |
100 |
200 2 |
300 |
500 |
700 |
1000 |
1500 |
Zawartość /7-aminofenolu [gg] w 1 cnT hydrolizatu (otrzymanego po uzupełnieniu próby po hydrolizie do 100 cmJ) |
0 |
I |
J |
5 |
7 |
10 |
15 |
Tak przygotowane wzorce poddać hydrolizie (ogrzewać w łaźni wodnej przez 1,5 godziny). Dalsze postępowanie (odmierzenie odpowiedniej ilości próby i uzupełnienie wodą do 100 cm oraz wykonanie reakcji indofenolowej) - patrz punkt 2.
Z uzyskanych wyników kalibracji sporządzić wykres zależności wartości absorbancji (A) od zawartości /7-aminofenolu [gg] w 1 cm' hydrolizatu (C) lub obliczyć na podstawie wyliczonego współczynnika kalibracji (k).
4. Obliczanie wyników
Zawartość /^-aminofenolu w badanej próbie (hydrolizacie) odczytać z wykresu kalibracyjnego, a następnie obliczyć stężenia /^-aminofenolu w badanym moczu. Należy uwzględnić, że 1 cm' rozcieńczonego hydrolizatu pobranego z kolby odpowiada 0,1 cm' pierwotnego moczu (z próby 10 cm’ moczu pochodzącego od robotnika uzyskano 100 cm' ostatecznego hydrolizatu).
Stężenie /7-aminofenolu w badanym moczu wynosi więc:
10C
X = _ [|-ig/cm3]
W
gdzie: X - stężenie /7-aminofenolu w badanym moczu lug/cm3|
C - ilość /?-aminofenolu w końcowej barwnej próbie [gg]
W - objętość hydrolizatu pobranego do oznaczenia [cm ']
Znając objętość badanej dwugodzinnej próby moczu, należy obliczyć szybkość wydalania /7-aminofenolu [mg/h] wg następującego wzoru:
a ‘ b
V - - [mg/h]
2 godz.
gdzie: V - szybkość wydalania /7-aminofenolu z moczem [mg/h] a - stężenie /7-aminofenolu w badanym moczu |mg/dm3|
b - objętość moczu zebranego w ciągu dwóch ostatnich godzin pracy [dnT] (np. 0.2 dnT)
3