Schowek02

Wykonanie ćwiczenia

Odważyć lOg produktu hodowlanego i dodać lOml 96%-owego etanolu. Po dokładnym wymieszaniu oddzielić wytrącony osad na filtrze bibułowym uprzednio zważonym. Wysuszyć pod wyciągiem i zważyć. Podać ilość dekstranu wytrąconego etanolem z prób hodowlanych zawierających różne stężenia sacharozy.

Oznaczenie ilości uwolnionej fruktozy

Odważyć lg próby po hodowli, dodać 20ml wody destylowanej, dokładnie wymieszać i sporządzić mieszaninę reakcyjną zawierającą

a)    lml rozcieńczonej próby, 1 ml roztworu kwasu 3,5-dinitrosalicylowego (DNS)

b)    lml wody destylowanej, 1 ml DNS (kontrolka)

c)    1 ml wzorcowego roztworu fruktozy o stężeniu 600pg/ml i 1 ml DNS.

Przygotowane mieszaniny umieścić we wrzącej łaźni wodnej na 5 minut Po wychłodzeniu dodać 8ml wody i po wymieszaniu oznaczyć absorbancję prób przy 540nm.

Obliczyć ilość uwolnionej fruktozy w lg próby hodowlanej

Abad

Ci = - • F (mg/ml) • 20 ml [mg/g]

Awz

Abad - absorbancja próby badanej

Awz - absorbancja próby wzorcowej

F - stężenie fruktozy w próbie wzorcowej (0,6mg/ml)

Oznaczenie ilości sacharozy niewykorzystanej w nrocesie biosyntezy dekstranu.

Po oznaczeniu fruktozy próbę uzupełnić wodą destylowaną do 50 ml. Sporządzić mieszaniny reakcyjne o składzie:

a) 0,5 ml badanej próby

0,5ml roztworu inwertazy (1 mg/ml) w buforze octanowym 0,05 M o pH 4,5 (próba właściwa)