skanuj0003

roślinne, a w szczególności owocniki pieczarki. W wykonywanym ćwiczeniu będzie używana tyrozynaza z pieczarki w postaci surowego wyciągu.

Aby otrzymać biosensor, a konkretnie w naszym przypadku elektrodę enzymatyczną, enzym (materiał biologiczny) musi być unieruchomiony na powierzchni czujnika. Istnieje wiele różnych metod unieruchamiania (immobilizacji) : adsorpcja, sieciowanie dwufunkcyj-nym reagentem, pułapkowanie w żelach, wiązanie kowalencyjne, mikrokapsułkowanie. W przypadku wykonywanego ćwiczenia zastosowane zostanie unieruchamianie w żelu albuminy wołowej sieciowanej aldehydem glutarowym (Rysunek 3).

O    O

NH₂ +    JC—ch₂ch₂ch—</ + H₂n4e j

B-h-N=c—CH₂CH₂CH₂—C=N—f E J H    H

Rysunek 3. Zasada unieruchamiania enzymu przez sieciowanie z białkiem obojętnym z wykorzystaniem aldehydu glutarowego ; B - białko obojętne (albumina z osocza

wołowego), E - enzym

Grupy aldehydowe reagują z grupami aminowymi białka tworząc zasady Schiffa i w efekcie białko zostaje związane w trójwymiarową strukturę obejmującą całą objętość roztworu, a efektem tego jest powstanie elastycznego żelu. Metoda ta jest prosta i tania, dlatego też jest wyjątkowo często używana do unieruchamiania enzymu.

2.    Cel ćwiczenia

Celem ćwiczenia jest otrzymanie krzywej kalibracyjnej elektrody enzymatycznej z ty-rozynazą na katechol z wykorzystaniem metody stacjonarnej pomiaru.

3.    Wykonanie ćwiczenia

3.1.    Aparatura

Galwaniczna elektroda tlenowa CTN-920.S z srebrną katodą i cynkową anodą (Zakład Technik Pomiarowych ELSNET, Wrocław)

Mikrokomputerowy tlenomierz CO-551 lub CPO-551 (Elmetron, Zabrze)

Czujnik temperatury MT-100

Ultra termostat Ul (Medingen, Niemcy)

Mieszadło magnetyczne

3.2.    Odczynniki i pozostały sprzęt

Bufor fosforanowy o pH = 7, 0,05 M

0,1 M roztwór katecholu w wodzie

25 % roztwór aldehydu glutarowego w wodzie

Albumina z osocza wołowego

Pieczarki

3