021 9

Wprowadzanie pierwszorzędowych grup

aminowych

W większości przypadków białka zawierają wystarczającą ilość grup aminowych odpowiednich do reakcji modyfikacji lub sprzęgania. Zdarza się jednak, że pewne peptydy oraz białka mają zbyt mało wolnych grup aminowych.

Takim przykładem jest peroksydaza chrzanowa (HRP) - tylko 2 wolne grupy aminowe.

Wprowadzenie dodatkowych grup aminowych zwiększa efektywność sprzęgania.

Modyfikacje grup karboksylowych diaminami

Diaminy-związki zawierające pierwszorzędowe grupy aminowe na obu końcach cząsteczki. W reakcji z grupą karboksylową powstaje wiązanie amidowe, na końcu -wolna grupa aminowa.

Uwaga! Modyfikacja diaminami maże mieć ogromny wpływ na całkowity ładunek białka i zmienia pl białka. Może mieć to istotny wpływ na aktywność białka.

Blokowanie grup funkcyjnych

Cele:

1.    Ukierunkowanie reakcji koniugacji względem konkretnej grupy funkcyjnej

2.    Zapobieganie niekontrolowanej polimeryzacji cząsteczek

3.    Zapobieganie utlenienia grup SH

4.    Zabezpieczanie grup funkcyjnych podczas reakcji sprzęgania bifunkcjonalnymi związkami sieciującymi

5.    Zakańczanie reakcji sprzęgania lub modyfikacji.

Blokowanie grup aminowych

Octan sulfo-NHS

Wysoka reaktywność względem grup aminowych w pH 7-9. prowadzi do acylacji amin; reakcja nieodwracalna.

Nie używać w buforach zawierających Tris, glicynę lub imidazol. Zalecane bufory fosforanowe, boranowe, węglanowe.