23

-    -    “ iłk rolowania białek jest ich wysalanie za pomocą siarczanu

_: ?t— mit; szych stężeniach tej soli wytrącane są np. z roztworu białka jaja e    a przy całkowitym nasyceniu roztworu białka siarczanem amonowym

zirazt -i airz —:iy. Zjawisko wysalania ma charakter odwracalny i wiąże się ze zmniejszeniem stopnia uw-odnienia zdysocjowanych grup aminokwasowych R występujących na powierzchni cząsteczki białka. Cząsteczki białka wskutek odebrania cząsteczek wody przez silnie zdysocjowane jony soli asocjują wówczas i ulegają wytraceniu w' formie osadu. Najłatwiej jest wysolić białko z roztworu, gdy znajduje się ono w' punkcie izoelektrycznym.

Odczynniki

1.    l-proc. roztwór glicyny.

2.    Roztwór białka jaja kurzego: rozpuścić białko jednego jaja w 100 ml 2-proc. roztworu chlorku sodowego.

3.    Rozcieńczony roztwór białka jaja kurzego: białko jaja kurzego (2) dwukrotnie rozcieńczyć 2-proc. NaCl.

4.    0,l-proc. acetonowy roztwór ninhydryny.

5.    6-molowy roztwór wodorotlenku sodowego.

6.    0,5-proc. roztwór siarczanu miedziowego.

7.    Stężony kwas azotowy.

8.    l-proc. roztwór octanu ołowiawego.

9.10-proc. roztwór kwasu trichlorooctowego.

10.    Nasycony roztwór siarczanu amonowego.

11.    Krystaliczny siarczan amonowy.

12.    l-proc. roztwór kwasu octowego.

Szkło i inne pomoce

Na 1 studenta przypada: statyw' z probówkami, pipety serologiczne na 1 ml — 4 szt., 5 ml — 3 szt, 2 ml — 2 szt., 10 ml — 2 szt. oraz 1 zlewka na 400 ml, 2 kolby stożkowe na 100 ml i lejek.

Wykonanie

i. Odróżnianie aminokwasów od innych związków organicznych. Odmierzyć do jednej probów^rki 1 ml glicyny (i), do drugiej 1 ml białka (3), dodać po 1 ml ninhydryny (4) i ogrzewać mieszaninę przez 3 min we wrzącej łaźni wodnej.

2> Odróżnianie białek (względnie peptydów) od wolnych aminokwasów. Odmierzyć do jednej probów'ki 1 ml białka (3), do drugiej 1 ml glicyny (i), dodać po 2 ml wodorotlenku sodowego (5) i jedną kroplę siarczanu miedziowego (<5), dobrze wymieszać i dodać kroplami dalsze 0,5 ml siarczanu miedziowego (6).

3. Wykrywanie aminokwasów zawierających pierścień aromatyczny. Odmierzyć do jednej probówki 1 ml glicyny (7), do drugiej 1 ml białka (3) (białko jaja kurzego zawiera znaczne stężenie aminokwasów’ aromatycznych i może być użyte jako ich źródło) i dodać po 1 ml

14

stężonego 1 ostudzić i c 4. Wyk probówki 1 sodowego ( 3—5 min,

5 .Koi palnikiem <

6.    Wyt trichlorooc

7.    Wyi dodać krop

(k Wys kurzego (2 wymieszać sączek z bil

Do pn aż do nasyć Dodać krop białek z ro2

Opracow

Podać przy użyciu

Pytania

1.    Któ: kwasu w fo

2.    Któi węgla? Wj;

3. Coi

4.    Jaki wego? Napi

5.    Co r zanikają w 1

6.    Jaks nych? Napń

©

U

(2)'