87

na H₂02 z utworzeniem difenochinonodiiminy i dwóch cząsteczek H-.0. Difenochinonodii-mina tworzy z cząsteczką benzydyny kompleks o zabarwieniu zielononiebieskim (błękit benzy dymowy, rys. 19).

\ r\ r^m-<^ł

-hn=K

fT^ \s

⁼\=NH +

2 H-0

RYS. 19.Reakcja benzydyny z żelazem hemoglobiny

Pod w-pływem łagodnych czynników utleniających oksyhemoglobina przechodzi w methemoglobinę. Reakcja ta polega na zmianie wartościowości żelaza hemowego z Fe" do Fe pod wpływem np. żelazicyjanku potasowego —barwa badanego roztworu przechodzi w^r brunatną.

Obecnoćś żelaza w^f hemoglobinie wykrywa się na podstawce reakcji charakterystycznej dla jonu żelazowego. Po zmineralizow^raniu próbki krwi w środow^fisku utleniającym (kwas siarkowy, kwas azotowy, nadsiarczan potasowy) powstające jony Fe³* tworzą z tiocyjanianem

Fe ^3r + 3CNS"

sól kompleksowy o krwistoczerwonym zabawieniu według reakcji: Fe(CNS>3

Oznaczanie zawartości hemoglobiny we krwi. Żelazo występuje we krwi prawdę wyłącznie v/ hemoglobinie. W surowicy jest niewielka jego ilość (50-175 pg/100 ml) wchłonięta z przewodu pokarmowego oraz uw^rolniona z hemoglobiny w' trakcie jej przekształcania w barwniki żółciowe. Wiedząc, że hemoglobina zawiera 0,33% żelaza, można wyliczyć jej steżenie oznaczając zawartość żelaza. Sposób ten nie wwmaga wiec wzorca hemoglobiny. Zawarte w hemoglobinie żelazo w postaci jonu żelazawego (Fe" ) zostaje uwolnione i utlenione pod wpływem działania stężonego kw^rasu siarkowego i nadsiarczanu potasowego do jonów żelazowych (Fe³*), które reagują z tiocyjanianem.

Stężenie wytworzonego kompleksu oznacza się fotometrycznie.

Materiałem do badań jest krew zwierzęca, która pow'inna zawierać jeden z niżej wymienionych czynników, zapobiegających jej krzepnięciu:

1)    szczawian (litowy, sodowy, potasowy) — 0,01 ml 20-proc. roztworu na 1 ml krwi.

2)    cytrynian (sodowy, potasowy) — 5 mg na 1 ml krwi.

3)    fluorek (sodowy, potasowy) — 10 mg na 1 ml krwi,

4)    etylenodiaminotetraoctan sodowy (EDTA) — 1 mg na 1 ml krwi.

5)    heparyna — 0,004 ml/ml krwi.

Odczynniki

1.    Stężony kwas siarkowy.

roztwór nasycony (7-8 g w 100 mi w'odvj.

2.    Nadsiarczan potasowy (Na2S->Og>

76