DSC00228 (7)

60. nM NaNQ₂ (roztwór wicowy zaw,er_aj_ący 60 nanomołi NOj' w tan’) miarą aktywności

powstałych w •    ^ azotanowej w itściemach ogórka jest ilość azotynów

oznacza •    ^,nkub4<*^{1 ł,ś}®*“ ^w buforze zawierającym azotan. W metodzie tej

zmodyfikowMj⁶"¹* ^JOm>W N°² W Płyn’^e m <"* ⁰⁸ Matta 1 ****- ^,999'

war'a” t "* *ⁿkubaeji dokładnie wymieszać zawartość penteylinówek Dla każdego (kontrola j warianty hodowli) przygotować po 2 probówki (razem 8) i podpisać je h (j ^Sar^° ^^{ak penic}y^,,nówki. Do probówek dodać po l cm³ inkubatu. W przypadku wariantu w roztworze KNO3 o stężeniu 10^J M inkubat .należy dwukrotnie -rozcieńcży.ć, to jest p obówki wprowadzić 0,5 cm³ inkubatu i dodać 0,5 cm³ wody destylowanej. Następnie do każdej probówki dodać 0,5 cm³ 1% SA i 0,5 cm³ 0,02% NE A. Zawartość probówek dokładnie wymieszać i umieścić je w ciemności na 20 minut. Po dodaniu 2 cm’ wody destylowanej i wymieszaniu oznaczyć absorbancję roztworów przy długości tali 540 nm wobec kontroli. Korzystając z krzywej wzorcowej (pkt. 4) odczytać zawartość jonów NO: w badanych próbach i dla każdego wariantu hodowli obliczyć aktywność reduktazy azotanowej w liścieniach ogórka. Wyniki wpisać do tabeli 1.

Tab. 1. Aktywność reduktazy azotanowej w izolowanych liścieniach ogórka.

Wariant hodowli liścieni	Objętość inkubatu [cm^3]	; i A540 po 1 h inkubacji		Zawartość Aktywność j Zawartość reduktazy j I®”^1011 1 InmoyUśckAlbl \
h2o				i 1 I l | \ \ -__ ---- -------------i
KŃOs 10 ^2 M				i ^:________________________________
KNOslO \M				‘

4. Wykonanie krzywej wzorcowej dla NO2'

Korzystając z roztworu wzorcowego KNO2 (60 pM) i wody destylowanej przygotować po 1 cm³ roztworów N0₂ o stężeniach od 6 do 60 nmol/cm³, stosując gradację co 6 nmol/cm³ Do probówek wprowadzić odpowiednią objętość (wg tabeli 2) roztworu wzorcowego i uzupełnić wodą destylowaną do 1 cm³. Do pierwszej probówki dodać tylko wodę destylowaną (ślepa odczynnikowa).