DSC00153 (24)

Ćwiczenie 1. AMINOKWASY

Celem ćwiczenia jest zapoznanie się z właściwościami aminokwasów oraz odróżnianie aminokwasów od białek.

Na podstawie przeprowadzonych reakcji identyfikacyjnych należy wykryć aminokwas w próbie.

Odczynniki

0,2% roztwór ninhydryny w 50% etanolu lub acetonie

1 % roztwory aminokwasów

0,5% roztwór wodny CuS0₄

20% NaOH

0,1 mol/l KOH

nasycony etanolowy roztwór 1-fluoro-2,4-dinitrobenzenu stężony HN0₃ stężony H₂S0₄ stężony HCI

1% roztwór kwasu glikoksalowego lub formaldehydu 1 % roztwór a-naftolu w etanolu 10% roztwór NaCIO (chloran(l) sodu)

2% roztwór (CH₃COO)₂Pb (octan ołowiu(ll)

2% roztwór nitroprusydku sodu

Sprzęt

statyw z probówkami

pipety i zakraplacze

łapy do probówek

wrząca łaźnia wodna

łaźnia wodna o temp. 40°C (313 K)

papierki wskaźnikowe

Materiał

roztwór białka jaja kurzego (rozpuścić białko z jednego jaja kurzego w 100 cm³ 2% NaCl)

4% roztwór żelatyny roztwór badany

1. Reakcje aminokwasów i białek    ,,    , ' _v

t    • t

. . )

1.1. Reakcje z ninhydryną \/

if

Reakcja ta polega na ogrzewaniu aminokwasów z etanolowym roztworem ninhydryny. W tych warunkach a—aminokwasy ulegają deaminacji i dekarboksylacja sama zaś ninihydryna zostaje zredukowana. Produkty redukcji ulegają kondensacji, w wyniku czego powstaje związek o barwie fioletowej.

Z aminokwasów jedynie prolina, hydroksyprolina i cysteina dają produkt o barwie żółtej. W tych warunkach białka tworzą z ninhydryną kompleks o barwie jasnoniebieskiej.

COOH

I

C — H ♦ I

R

0 II	COOH	0 II H
rY\	^1 ^
c=o —•»	C=NH ♦	i c
II	1 kJ R	OH II
0		0

ninhydryną

H_ZN

COOH

C = NHHjO —RCHO + NH3+ CO2 R

■CH2O

niebieskofioletcwy produkt

H    ⁰

r    «

ry

Ur

<y^c\    /■

¹ B ^CHOH * 2NH3 + O=C

«    h

⁰    0

żółty produkt reakcji prolłny

147