DSC00154 (23)

Ćwiczenie 1. AMINOKWASY

Celem ćwiczenia jest zapoznanie się z właściwościami aminokwasów oraz odróżnianie aminokwasów od białek.

Na podstawie przeprowadzonych reakcji identyfikacyjnych należy wykryć aminokwas w próbie.

Odczynniki

0,2% roztwór ninhydryny w 50% etanolu lub acetonie

1 % roztwory aminokwasów

0,5% roztwór wodny CuS0₄

20% NaOH

0,1 mol/l KOH

nasycony etanolowy roztwór 1-fluoro-2,4-dinitrobenzenu stężony HN0₃ stężony H₂S0₄ stężony HCl

1% roztwór kwasu glikoksalowego lub formaldehydu 1 % roztwór a-naftolu w etanolu 10% roztwór NaCIO (chloran(l) sodu)

2% roztwór (CH₃COO)₂Pb (octan ołowiu(ll)

2% roztwór nitroprusydku sodu

Sprzęt

statyw z probówkami

pipety i zakraplacze

łapy do probówek

wrząca łaźnia wodna

łaźnia wodna o temp. 40°C (313 K)

papierki wskaźnikowe

Materiał

roztwór białka jaja kurzego (rozpuścić białko z jednego jaja kurzego w 100 cm³ 2% NaCl)

4% roztwór żelatyny roztwór badany

\/

/VU'^ł/vop^v'^^:p

1. Reakcje aminokwasów i białek

\ ;

1.1. Reakcje z ninhydryną [/

8

Reakcja ta polega na ogrzewaniu aminokwasów 8 etanolowym roztworem ninhydryny. W tych warunkach a-aminokwasy ulegają deaminacji i dekarboksylacja. sama zaś ninihydryna zostaje zredukowana. Produkty redukcji ulegają kondensacji, w wyniku czego powstaje związek o barwie, fioletowej. ; ,

Z aminokwasów jedynie prolina,_hydroksyproiina i cysteina dają

produkt o barwie żółtej. W tych warunkach białka tworzą z ninhydryną kompleks o barwie jasnoniebieskiej.

H₂N

0		0
COOH i r	COOH	II r
r^HłClc>^0-' ^R II	Ć = NH +J^ R	m 1
0		0

ninhydryną

COOH

I

CsNH + ł^O —S RCHO + NH₃+C02 R

0

II

c

\

II

o

CHOH+2NH3+

o=c

0“NH/    O

II    II

N=C U te

H2O

żółty produkt reakcji proliny

niebieskofiotetewy produkt

147