28305

1)    hodowlo komórkowe I tkankowo - umożliwiają badanie procesów komórkowych in vitro (poza organizmem)

*    zakłada się je umieszczając małe fragmenty ciała. np. skóry, w odpowiedniej pożywce

*    po kilkudziesięciu godzinach na obwodzie tego fragmentu pojawiają się wywędrowujące z niego komórki - flbroblasty (komórki twórcze tkanki łącznej właściwej)

*    komórki te się dzielą, co powodiąe powiększanie hodowli

*    hodowla pierwotna - złozona z tkanek pobranych bezpośrednio z organizmu

*    po pierwszym przeniesieniu komórek do innego naczynia, czyli po tzw. pierwszym pasażu, po pewnym czasie uzyskuje się tzw. linię komórkową

*    linie komórkowe wyprowadzane z tego samego matenału mogą się znacznie różnić właściwościami w zależności od warunków hodowli

*    liczne komórki in wtro starzeją się i obumierają, obserwiąe się różne zjawiska towarzyszące temu procesowi, m.in. uszkodzenia DNA. zmiany stężenia RNA, skracanie chromosomów

■ wyodrębnia się tez białka znamionujące rychłą śmierć komórek

2)    hodowle tkankowe prowadzi się również, wykorzystując komórki roślinne różnych organów

*    w takich hodowlach uczeni mogą regenerować całe rośliny hodowane na syntetycznych pożywkach wzbogaconych w substancje hormonalne

*    metody hodowli komórkowej i tkankowej roślin pozwalają śledzić procesy wzrostu i rozwoju roślin, otrzymywać rośliny o korzystnych cechach genetycznych, dokonywać zmian składu genetycznego

BARWIENIE KOMÓREK

1)    Barwienie fluorescencyjne

*    technika nadawania kolorów składnikom komórek i tkanek przy użyciu barwników fluorescencyjnych

*    fluorescencja - właściwość wypromieniowywania przez barwnik fluorescencyjny światła innego koloru mz światło wcześniej zaabsorbowane

*    barwnik fluorescencyjny (np. oranż akrydyny) ma zdolność do wyemitowania fluorescencjl o długości fali większej niz zaabsorbowana

*    dzięki tej technice możliwe jest przyżyciowe barwienie struktur i substancji komórkowych (bez zaburzania życia komórki)

*    efekty barwienia można zaobserwować z zastosowaniem mikroskopu fluorescencyjnego, który ma nadfioletowe źródło światła w postaci lampy rtęciowej lub światła emitowanego przez laser (mikrofotografia konfokalna)

2)    Znaczenie barwienie

*    pozwala na uwidacznianie struktur komórkowych słabo lub zupełnie niemożliwych do zobaczenia w preparatach świeżych (mebarwionych)

*    barwienie pojedyncze - używa się jednego barwnika

*    barwienie złożone - używa się wielu barwników kolejno lub równocześnie

*    najczęściej używane barwniki

Struktura/składnik komórkowy	Barwnik	Efekt barwny
Ściana komórkowa celdozowa	Karmin ałunowy	Czerwony
Ściana komórkowa zdrewniała	ZlelerTjodowa	Zielony
Jądro komórkowe	Czerwień jądrowa	Jasnoczerwony
Ziarna skrobi	Płyn Lugola	Fioletowo-niebieski
Krople tłuszczu	Sudan III 1 IV	Czerwony

MIKROMANIPULACjE

•    nowoczesne techniki stosowane w cytologii, neurobkilogli i embriologii eksperymentalnej (np. z procesach klonowania zarodków)

•    polegają na zabiegach chirurgicznych, przeprowadzanych przy użyciu mlkronarzędzl (mikropipet, mikroskalpeli). poruszanych z wielką precyzją za pomocą tzw mlkromanlpulatorów

•    ciekawym przykładem są tu mlkroiniekcje

-    DNA wprowadza się bezpośrednio do jądra zapłodnionej komórki jajowej za pomocą mikropipety szklanej o średnicy 0.1 mikrometra

-    zabieg wykonuje się pod mikroskopem

-    jest powszechnie stosowany w celu uzyskiwania zwierząt zmodyfikowanych genetycznie