101736

101736



7) GFP to białko pomocnicze-akceptor energii z aequoryny, reemityjace się w postaci zielonego świtła

Zastosowanie:

1)    do śledzenia interakcji pomiędzy proteinami oraz lokalizacji białek w organizmie.

2)    stosowany jest jako gen reporterowy w badaniach aktywności promotorów i poziomu ekspresji genów znajdujących się pod ich kontrolą.

3)    do wizualizacji żywych komórek-brak artefaktów-pochodnych utrwalania i barwienia

4)    ujawnianie organizmów chimeiycznych- wczesne etapy regeneracji

Zalety:

1)    wizualizacja łatwa- pod wpływem światła UV fluoryzuje na zielono

2)    Jest małe i może być doczepiane do innych białek co umożliwia monitorowanie ich zachowania w komórce.

3)    Otrzymano sztuczne wersje tego białka świecące w innych kolorach, co pozwala na jednoczesne badanie różnych procesów

4)    Jak wspomniano, fluorescencja GFP jest naturalną własnością tego białka, co więcej poprawne funkcjonowanie peptydu nie wymaga żadnych dodatkowych substratów ani kofaktorów.

5)    Gen GFP ulega ekspresji w komórkach bakterii, drożdży, drosopłiili, roślin a także w komórkach ssaczych.

6)    Ponadto GFP jest bardzo stabilny in vivo, nie powoduje żadnych skutków ubocznych,

7)    fuzja z -N i -C końcami różnych białek przeprowadzana wewnątrz komórki nie prowadzi do utraty własności fluorescencyjnych

8)    Gen GFP może być wprowadzony do organizmu i następnie do genomu po przez hodowle, i wstrzykniecie przez wektor wirusowy lub transformacje

9)    prosty, makroskopowy screening żywych komórek, tkanek, całych roślin w UV

10)    możliwość zastosowania a mikroskopie konfokalnym

11)    przeżyciowe podbarwianie- np. jodkiem propidyny - ściany komórek meryste ma tycz nych

Ekspresja dzikiego GFP nie przebiega prawidłowo u roślin. Niezbędne modyfikacje:

1)    usunięcie ukrytego intronu będącego przyczyną mis-splicingu w wyniku czego zostaje usunięte 80 nukleotydów

2)    akumulacja GFP w nukleoplazmie- trudność w regeneracji roślin. Toksyczność GFP wynika z generacji wolnych rodników związanych z fluorescencją podczas wzrostu w świetle co prowadzi do uszkodzeń DNA. Dlatego są opracowywane metody do kierowania GFP do określonych przedziałów wewnątrzkomórkowych. Najlepiej do ER

3)    otrzymuję się tesmostabilne mutanty

4)    zmienia się właściwości spektralne- na przykład posiadanie podwójnego piku wzbudzenia.

Wykorzystuje się dwa głów ne typy wektorów bazujących na plazmidzie Ti:



Wyszukiwarka

Podobne podstrony:
Jeśli chodzi o trzeci temat, to w Polsce oprócz Giełdy Energii rozw inął się rynek bilansujący i ry
page0074 70 Podstawą, na której materyaliści opierają powyższą bypotezę, to wielkie prawo zachowania
egz3 2 1* Białko, które po utworzeniu kompleksu z cAMF aktywuje polimcra/a RN A to białko a)
Jest to najtańszy sposób produkcji energii, gdyż po wybudowaniu tamy paliwo jest prawie za darmo. Wi
RSCN5721 PRIONY Prion to białko zbudowane z około 250 aminokwasów, które występuje w komórkach zdrow
DSCF4636 AKTYWNE SŁUCHANIE - to okazywanie rozmówcy akceptacji, szacunku, serdeczności i ciepła, to
DSCN0328 Agenda Bałtyk 21 Siedem sektorów i wiodące strony to: rolnictwo (HELCOM i Szwecja), energia
viewer14 1. Energetyka wysiłków fizycznych Bilans energetyczny - to różnica pomiędzy dostarczaną ene
11. Jedną z nich zaginamy pod odpowiednim kątem (tak jak jest to pokazane na zdjęciu).12. To było po
c.) INNOWACYJNA - działa, kieruje się do wewnątrz, jest to funkcja pomocnicza w stosunku do dwóch po
Wstęp Pompa ciepła jest to technologią ogrzewania domów energią elektryczną, do której dodaje się 2-
Jak to zrobić w Polsce ? Ile energii elektrycznej pochodzi    Ile wynosi koszt wytwor
22275 Image41 (10) £lEKTSONIKA^[igg —Do czego to służy? Jest to układ pomocny przy np. wytyczaniu pu

więcej podobnych podstron