101739

4)    Białko przyłączone w obrębie prawej granicy usuwa T-DNA a białko przyłączone do lewej granicy pobudza bakteryjną maszynerię do naprawy powstałej luki w plazmidzie.

5)    Po wycięciu T-DNA otaczany jest przez VirE2 tworząc cylindryczne, wydrążone w środku włókienko- kompleks T.

W wyniku działania białek VirDl i VirD2 następuje wycięcie fragmentu DNA i powstaje niedojrzały kompleks T składający się z jednoniciowego fragmentu DNA wyciętego z T-DNA białka VirD2. Następnie jest otoczenie kompleksu T przez białko VirE2 i tworzy się dojrzały kompleks T.-te etapy to obróbka plazmidowego DNA

6)    Kompleks ten jest eksportowany przez mechanizm sekrecyjny typu IV do komórki gospodarza. System ten kodowany jest przez operon virB i gen virD4

TSS4 jest to model jednoetapowy, Sec zależny. Sekrecja DNA zachodzi bez pośrednictwa peryplazmtycznego. Białka VirB4 i VirBl 1 posiadają aktywność wiązania nukleotydów i są źródłem energii dla sekrecji. Lipoproteina VirB7 tworzy kompleks z VirB9 poprzez wiązanie dwusiarczkowe, który może umocować aparat typu IV w OM.

7)    Dla eksportu T-DNA z 11 białek kodowanych przez operon virB i virD4 tworzy się T-transporter, czyli pilus, który działa jak kanał do transłokacji, otwierający się w odpowiedzi na sygnały roślinne (kontakt z receptorami na powierzchni rośliny). Głównym składnikiem tego pilusa jest białko VirB2, a mniejszym VirB5. Wnika T-DNA do cytopłazmy rośliny przez skrócenie pilusa i fuzji membran poszczególnych komórek

Schemat T-pilusa (kanał ten (pilus) tworzony jest przez Agrobacterium):

-VirB8 9 i 10 to białka peryplazmatyczne, z których VirB8 i 10 są zakotwiczene w błonie cytoplazmatycznej

-VirB9 posida sekwencje sygnałową do eksportu i jest cały umiejscowiony w peryplazmie -VirB7 to lipoproteina zakotwiczona w OM. Połączona przez dwusiarczkowi wiązanie z VirB9, jak też z pilusem T, utworzonym z białek VirB2 i VirB5

-    VirB9 i peryplazmatyczne domeny VirB8 i 10 oddziałują na siebie tworząc kompleks penetrujący ścianę komórkową roślin

8)    Fragment T po wniknięciu do komórki roślinnej wnika poprzez pory otoczki jądrowej do jądra gdzie ulega integracji z genomem roślinnym. Integracja T-DNA z genomem rośliny na drodze rekombinacji nieuprawnionej. VirD2 jest niezbędny dla precyzyjnej integracji ssT-DNA Ekspresja. Następuje aktywacja genów.

9)    Na skutek ekspresji przekazywanych genów następuje tumorogeneza- tworzenie tkanki tumorowej.. Są wydzielane opiny, są dla bakterii źródłem pokarmu. Dodatkowo dochodzi do stymulacji biosyntezy auksyn i cytokinin, lub tez dochodzi do ekspresji wprowadzonych genów.

Regulatory:

-    Operony virA i virG odpowiedzialne są za dwuskładnikowy system regulatorowy kinazy liistydynowej, w którym VirA jest membranowym białkiem sensorowym a VirG cytoplazmatycznym regulatorem odpowiedzi.

-    VirA wykiywa obecność eksudatów zranionej rośliny albo bezpośrednio albo za pomocą białek PIO i P21 kodowanych przez DNA chromosomowe bakterii.

-    W dużym stężeniu glukozy czy arabinozy dochodzi do aktywność białka ChvE, kodowanego przez genom chromosomowy bakterii. Glukoza czy arabinoza obniżają koncentrację związków fenolowych niezbędnych do aktywacji genów vir, gdyż aktywują one właśnie białko ChvE. Wiąże się ono z cukrami. Wchodzi ono w reakcję z perypalzmatyczna domeną białka VirA

-sygnał ten jest jest transmitowany przez transmambranową domenę białka VirA do domeny kinazowej, która jest zwykle fosforyzowana w liistydynowej reszcie. Sygnał ten powoduje fosforylację asparaginianowej reszty białka VirG -kolejny regulator VirG to chromosomowy gen ChvD