55289

odbieg denaturuje

Pomiar szybkości rekacji w funkcji [substratu] w rożnych pH pozwala określić wpływ pH na Km, Kcat/Km

najpierw trzeba sprawidzić czy substrat zmienia właściwości od pH a pomocą miareczkowania

pKa w roztworzae HA ~ H+ +A-Ka = [H+] [A-]/HA] pKa=-logKa

więc pH=pKa+log (A-)/([HA])

pKa wartość pH przy kórej połowa kwasu jest dysocowana do sprzężonej zasady

wpływ pH na Kcat wskazuje na zaangażowanie grup kwasowo zasadowych w etap katalityczny substrat - produkt co znaczy że etapy jonizacji zachodzą w kompleksie ES zależność Kmod Ph wskazuej na ważność grup kwasowo zasadowych dla wiązania substratu Wykres Kcat/Km jest uogólnieniem powyższych

często pKa nie możę być przypisane do konkretnego amionkwasu raczej ilustruje specyficzny zestaw interakcji między resztami enzymu które in situ tworzą centrum kwasowo-zasadowe jedyne w swoim rodzaju także hydrofobowe wnętrze enzymu możę znaczenie zmnieniać pKa łańcuchów bocznych w porównaiu do ich typowych wartości mierzonych w roztworach np. profil pH dla kcat jekiegoś enzymu możę wskazywać na jonizację His ale równie dobrze wpływ temperatury